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.2006年1月;82(1):99-110.
doi:10.1016/j.exer.2005.0007。 Epub 2005年7月12日。

色素上皮衍生因子(PEDF)和血管内皮生长因子(VEGF)在老年人脉络膜和年龄相关性黄斑变性眼睛中的表达

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色素上皮衍生因子(PEDF)和血管内皮生长因子(VEGF)在老年人脉络膜和年龄相关性黄斑变性眼睛中的表达

伊姆兰·布托等。 实验眼睛分辨率. 2006年1月.

摘要

本研究的目的是检测血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)在老年人脉络膜中的定位和相对水平,并确定其在老年性黄斑变性(AMD)中的定位或相对水平是否发生变化从8名无脉络膜视网膜疾病证据或病史的老年对照供体(年龄范围:75-86岁;平均年龄:79.8岁)和12名诊断为AMD的供体(年纪范围:61-105岁;平均年纪:83.9岁)中获取眼组织。组织冷冻保存,用兔抗人血管内皮生长因子多克隆抗体和兔抗人PEDF多克隆抗体进行链霉亲和素碱性磷酸酶免疫组化。抗体与过量重组人PEDF或VEGF肽的预孵育阻止了抗体的结合。在邻近组织切片中用小鼠抗人CD-34抗体鉴定脉络膜血管。三名独立观察者对免疫组织化学反应产物进行分级。在老年对照组脉络膜中,VEGF和PEDF定位最显著的部位是RPE-Bruch的膜-毛细血管复合体,包括RPE基底膜、毛细血管间隔和脉络膜基质。在老年对照组脉络膜中,VEGF和PEDF的免疫染色强度和定位无显著差异。血管内白细胞的VEGF免疫反应最强。AMD脉络膜的VEGF免疫染色模式和强度与老年对照组相似。然而,在AMD脉络膜的RPE细胞(p=0.0073)、RPE基底膜(p=0.0141)、Bruch膜(p<0.0001)和脉络膜基质(p=0.011)中,PEDF免疫反应显著降低。椎间盘状瘢痕中PEDF免疫反应最强。Drusen和基底层沉积物(BLDs)VEGF和PEDF呈阳性。在老年对照受试者中,VEGF和PEDF免疫染色在RPE布鲁赫膜绒毛膜毛细管复合体中最强。在AMD中,RPE细胞、RPE基底膜、Bruch膜和脉络膜基质中的PEDF显著降低。这些数据表明,PEDF和VEGF之间存在着一个关键的平衡,并且PEDF可能会抵消VEGF的血管生成潜能。PEDF的减少可能会破坏这种平衡,并允许AMD患者脉络膜新生血管(CNV)的形成。

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数字

图1
图1
用来自老年对照眼的VEGF和PEDF抗体孵育的眼下脉络膜切片(病例8)。(A) CD-34的免疫染色与包括脉络膜毛细血管在内的脉络膜血管有关。(B)在脉络膜毛细血管和大脉络膜血管中存在蓝色APase反应产物,在Bruch膜和血管基底膜中存在粉红色PAS染色。VEGF(C)和PEDF(D)的免疫染色在某些区域的RPE基底膜、Bruch膜、脉络膜毛细血管基底膜、毛细血管间隔膜中显著,在脉络膜基质中不太强阳性。切片(A、C、D)中的色素被RPE和脉络膜黑素细胞漂白。
图2
图2
用兔抗人VEGF(A)和兔抗人PEDF(B)免疫染色的老年对照眼(病例7)的脉络膜切片,用BSA预孵育过夜,显示布鲁赫膜、脉络膜毛细血管基底膜和毛细血管间隔膜的显著标记。PEDF的免疫反应产物强度高于VEGF。这些被认为是“模拟嵌块”样本,因为它们与一种控制蛋白BSA预先孵育。通过将抗体与抗原、VEGF肽(C)和重组人PEDF(D)预先孵孵育过夜,脉络膜免疫反应几乎被消除。强烈的VEGF和PEDF免疫反应与水肿有关(箭头所示)。RPE(箭头)也有PEDF免疫反应。(星号、脉络膜血管)。
图3
图3
AMD眼的眼下脉络膜切片(病例11)。(A) CD-34免疫染色显示脉络膜毛细血管排列良好,而PAS染色(B)显示BLD(箭头)。VEGF(C)的免疫染色在脉络膜结构中显示出强烈的免疫反应性,而PEDF免疫反应性(D)比VEGF弱。BLD(箭头)对VEGF也呈阳性,而PEDF仅与BLD弱相关。
图4
图4
血管内皮生长因子和PEDF在AMD眼的免疫定位(病例11),与图3中的受试者相同。切片是从脉络膜鼻到视神经头的非病理区域。(A) CD-34的免疫染色与脉络膜毛细血管相关,而APase/PAS染色(B)显示正常的脉络膜形态。VEGF(C)和PEDF(D)抗体的免疫染色与老年对照眼相同。
图5
图5
平均免疫反应分数±标准偏差用于老年对照组(黑色)和AMD(白色)眼睛的脉络膜结构。RPE中PEDF(A)的免疫反应性评分显著降低(第页=0.0073),RPE基底层(第页=0.0141),布鲁赫膜(第页<0.0001)和脉络膜基质(第页=0.0161)。AMD眼和老年对照眼的脉络膜结构VEGF免疫反应评分(B)无显著差异(第页= 0.4444).
图6
图6
AMD眼(病例15)伴色素上皮脱离(PED;*)。CD-34(A)免疫染色与脉络膜血管相关,PED下脉络膜毛细血管明显脱落。PAS染色(B)显示PED中的BLD、浆液和白细胞成分(B、C和D中的箭头)。请注意,BLD、内脉络膜和PED中的白细胞VEGF(C)呈强阳性,而PEDF免疫反应性(D)在BLD和Bruch膜之间的液体中最为强烈。
图7
图7
AMD患者(病例12)的视网膜和脉络膜切片显示,与迁移细胞(箭头)相关的VEGF(C)免疫反应强烈,而PEDF(D)在细胞中的强度较小,但在BLD中更为强烈。PAS(B)染色清楚显示细胞(箭头)和BLD。CD-34(A)显示脉络膜毛细血管明显脱落。
图8
图8
AMD眼脉络膜切片(病例16),瘢痕内有盘状瘢痕,形成小的CNV。CD-34(A)和APase(B)标记显示有存活的CNV(箭头)和疤痕中的粉红色PAS染色(星号)。CNV具有与其相关的强烈VEGF免疫反应性(C)(箭头),而CNV中PEDF(D)呈阴性。疤痕(星号)的PEDF比VEGF多。此外,与VEGF相比,脉络膜中的PEDF免疫反应性较弱。

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