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.2005年6月24日;280(25):23978-86.
doi:10.1074/jbc。M414260200。 Epub 2005年4月20日。

非编辑性I类氨酰-tRNA合成酶对tRNA依赖的氨酰腺苷酸水解

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非编辑性I类氨酰-tRNA合成酶对tRNA依赖的氨酰腺苷酸水解

Ita Gruic-Sevvj公司等人。 生物化学杂志. .
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摘要

谷氨酰胺-tRNA合成酶生成Gln-tRNA(Gln)10(7)倍于Glu-tRNA(Gln),并且需要tRNA在反应的第一步合成活化的氨酰腺苷酸。为了更密切地检查tRNA在氨基酸激活中的作用,开发了几种使用tRNA类似物的分析,其中3'-末端A76核苷酸的2'-OH基团被氢(tRNA(2'HGln))取代。这些实验表明,在存在类似物的情况下,kcat/Km减少了10(4)倍,表明tRNA在活化反应中具有直接催化作用。A76 2'-OH基团在氨酰化反应中的催化重要性反映了最近在核糖体上的肽基转移期间证明的这一部分的类似作用。出乎意料的是,在tRNA(2’HGln)存在的情况下,利用α-32P标记的ATP底物对Gln-AMP形成的跟踪显示,AMP的积累速度是Gln-AMP的5倍。冷捕获实验表明,Gln-AMP水解的非酶速率太慢,无法解释AMP的快速形成;因此,Gln-AMP水解形成谷氨酰胺和AMP必须由GlnRS x tRNA(2’HGln)复合物直接催化。谷氨酰胺腺苷酸的水解是一种新的反应,它直接类似于通过编辑合成酶(例如异亮氨酸-tRNA合成酶)对非共轭氨酰腺苷酸进行的预转换编辑水解。由于谷氨酰胺基-tRNA合成酶不具有空间上独立的编辑结构域,这些数据表明,在I类tRNA合成蛋白酶的合成位点内可以发生类似于翻译前编辑的反应。

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