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比较研究
.2005年4月;86(第4部分):1045-1053。
doi:10.1099/vir.0.80677-0。

蜱传脑炎病毒感染载体和复制子载体的异源基因表达及其与α病毒复制子的直接比较

附属公司
比较研究

蜱传脑炎病毒感染载体和复制子载体的异源基因表达及其与α病毒复制子的直接比较

雷纳尔·盖尔克等。 J Gen Virol公司. 2005年4月.

摘要

建立了黄病毒蜱传脑炎病毒(TBEV)作为外源基因表达载体系统。基因组3'非编码区的可变区被表达盒取代,该表达盒由在内部核糖体进入位点元件的翻译控制下的报告基因增强的绿色荧光蛋白(EGFP)组成,在感染性病毒基因组和缺乏表面蛋白prM/M和E基因的复制子的背景下。通过荧光激活细胞分选分析测量表达水平和表达稳定性,并将其与来源于委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)的已建立的α病毒复制子载体进行比较,该载体在其天然亚基因组启动子的控制下表达EGFP。在第一天,α病毒复制子的表达水平比黄病毒复制子高约180倍,但在第2天和第3天,这一差异分别下降到约20倍和10倍。转染后4至6天,由于广泛的细胞杀伤,VEEV复制子的外源基因表达几乎完全消失。相反,在TBEV复制子的情况下,阳性细胞的百分比和EGFP的表达量在近4周的时间内仅表现出中度下降。感染性TBEV载体表达的EGFP始终低于TBEV复制子。在四个细胞培养传代中,感染载体保持了显著表达。结果表明,VEEV载体在实现高表达水平方面具有优势,但TBEV系统可能有利于需要适度但更持久的基因表达的应用。

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