跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2005年3月23日；24(6):1243-55.
doi:10.1038/sj.emboj.7600596。 Epub 2005年3月10日。

TRB3是一种新的内质网应激诱导基因，通过ATF4-CHOP途径诱导并参与细胞死亡

大冈信美 1, Satoshi Yoshii先生, Takayuki Hattori公司, 小崎菊（Kikuo Onozaki）, Hayashi Hidetoshi
附属公司

TRB3是一种新的内质网应激诱导基因，通过ATF4-CHOP途径诱导并参与细胞死亡

大冈信美等人。 欧洲工商管理硕士J. .

摘要

C/EBP同源蛋白（CHOP）是一种应激诱导型核蛋白，对细胞程序性死亡和再生的发展至关重要；然而，其功能的调节还没有很好的特征。Slbo是C/EBP（CCAAT/enhancer binding protein）的果蝇同源物，被证明不稳定。在这里，我们确定TRB3是人类的三联体同源物，它与CHOP相关，以抑制CHOP依赖的转录激活。TRB3是在CHOP之后由各种形式的内质网应激诱导的。衣霉素处理增强了TRB3启动子的活性，而CHOP的主要负形式抑制了衣霉素诱导的激活。此外，TRB3启动子中的衣霉素反应区包含与CHOP结合位点重叠的氨基酸反应元件，CHOP和ATF4协同激活该启动子活性。内源性ATF4或CHOP表达的敲除显著抑制了膜霉素诱导的TRB3诱导。此外，TRB3表达的敲低降低了内质网应激依赖性细胞死亡。这些结果表明，TRB3是CHOP/ATF4的一个新靶点，通过抑制CHOP/ATF4功能下调其自身诱导作用，并参与内质网应激期间CHOP依赖性细胞死亡。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
TRB3在内质网应激期间诱导。(A、 B类)在存在或不存在10μg/ml环己酰亚胺（CHX）的情况下，用2μg/ml衣霉素处理293（A）或HepG2细胞（B），持续指定的时间。使用每个特定探针制备总RNA并通过Northern印迹分析。(C)用2μg/ml衣霉素、10μM MG132、100μg/ml MMS或2μM A23187处理293个细胞6h。用特异性引物通过RT-PCR分析细胞中的每个mRNA水平。三号机房，32个周期；CHOP公司，30个循环；GAPDH公司，24个周期。(D类)293（顶部）、A375（中部）和HepG2（底部）细胞在指定时间内用2μg/ml衣霉素处理。制备细胞裂解液，并对等量的蛋白质进行SDS-PAGE。用抗人TRB3、抗CHOP、抗ATF4或抗β-肌动蛋白抗体进行Western blotting。
图2
图2
TRB3与CHOP互动体内. (A类)CHOP突变体的构建。(B、 D类)293个细胞瞬时转染了所示的构建物。36 h后，用10μM MG132处理细胞12 h。细胞裂解物用抗Flag抗体免疫沉淀，用抗Myc抗体免疫印迹。通过用抗Flag或抗Myc抗体对细胞裂解物进行免疫印迹来评估每个蛋白的表达水平。(C)TRB3缺失突变体。KD：激酶样结构域。
图3
图3
TRB3抑制CHOP转录激活。(A类)不同基因中CHOP反应元件的比对。(B类)用融合了GAL4-dbd、pCMV5-GAL4-CHOP、pFR-luc和pCMV-β-gal的CHOP野生型或缺失突变体的表达质粒瞬时转染293细胞。48小时后，测量细胞裂解液中的荧光素酶活性，并用β-半乳糖苷酶活性标准化。(C、 D类)将p（CHOP）瞬时转染A375细胞4-Luc、pCMV-β-gal和CHOP和NF-IL6表达载体的各种组合，无论是否含有TRB3。48小时后，测量细胞裂解物中的萤光素酶活性，并用β-半乳糖苷酶活性进行标准化。(E类)用Gal4-CHOP（WT）和/或TRB3、pFR-luc和pCMV-β-gal的表达质粒瞬时转染293细胞。48小时后，测量细胞裂解物中的萤光素酶活性，并用β-半乳糖苷酶活性进行标准化。插图描绘了GAL4-dbd数据的放大图。(F、 G公司)将p（CHOP）瞬时转染A375细胞4-Luc、pCMV-β-gal和CHOP和NF-IL6表达载体的各种组合，有或没有TRB3的野生型或缺失突变体。48小时后，测量细胞裂解物中的荧光素酶活性，并用β-半乳糖苷酶活性进行标准化。在三个独立的实验中也得到了类似的结果。
图4
图4
CHOP过度表达导致TRB3诱导。(A类)用pTRB3-Luc和pCMV-β-gal瞬时转染293细胞。24小时后，不处理细胞或用2μg/ml衣霉素处理细胞16小时。测量细胞裂解液中的荧光素酶活性，并用β-半乳糖苷酶活性进行标准化。(B类)将pTRB3-Luc和pCMV-β-gal组合与CHOP和/或NF-IL6表达载体瞬时转染293细胞48小时。测量细胞裂解液中的荧光素酶活性，并用β-半乳糖苷酶活性进行标准化。(C)在CHOP或TRB3野生型或突变型表达载体存在下，用pTRB3-Luc和pCMV-β-gal瞬时转染293细胞。24小时后，不处理细胞或用2μg/ml衣霉素处理细胞16小时。测量细胞裂解物中的荧光素酶活性，并用β-半乳糖苷酶活性进行标准化。(D类)用pTRB3-Luc、pCMV-β-gal、对照siRNA和/或TRB3-siRNA瞬时转染293细胞。36 h后，不处理细胞或用2μg/ml衣霉素处理细胞16 h。测量细胞裂解液中的荧光素酶活性，并用β-半乳糖苷酶活性标准化。在三个独立的实验中也得到了类似的结果。
图5
图5
基因突变分析三号机房发起人。(A类)的构造三号机房启动子报告基因。位置+1显示TRB3转录的起始位点。(B类)用pTRB3-Luc、pCMV-β-gal和CHOP/NF-IL6或ATF4表达载体瞬时转染293细胞。24小时后，使细胞未经处理或用2μg/ml衣霉素处理16小时。测量细胞裂解物中的萤光素酶活性，并用β-半乳糖苷酶活性进行标准化。(C)ERSE在三号机房发起人。(D类)的构造三号机房启动子报告基因。(E类)用pTRB3-Luc和pCMV-β-gal瞬时转染HepG2细胞，24 h后用2μg/ml衣霉素处理16 h（左）。用pTRB3-Luc、pCMV-β-gal和CHOP/NF-IL6或ATF4的指示表达载体瞬时转染293细胞。测量细胞裂解物中的萤光素酶活性，并用β-半乳糖苷酶活性进行归一化（右）。HepG2细胞中的结果显示，因为膜霉素诱导的激活水平高于293细胞。293个细胞也获得了类似的结果。在三个独立的实验中也得到了类似的结果。
图6
图6
CHOP和ATF4合作激活三号机房发起人。(A类)AARE在三号机房启动子及其相关元件。(B–E类)将pTRB3-Luc和pCMV-β-gal与所示表达载体瞬时转染293细胞48小时。测量细胞裂解液中的荧光素酶活性，并用β-半乳糖苷酶活性进行标准化。在三个独立的实验中也得到了类似的结果。
图7
图7
ATF4或CHOP的敲除抑制了TRB3的诱导。(A类)野生型和NF-IL6−/−MEF用2μg/ml衣霉素处理指定时间。使用指定的小鼠cDNA作为探针，制备总RNA并通过Northern印迹法进行分析。(B、 C类)用对照siRNA、ATF4 siRNA或CHOP siRNA瞬时转染293细胞。48小时后，用2μg/ml衣霉素处理细胞，持续指定时间。用抗TRB3、抗ATF4、抗CHOP和抗β-肌动蛋白免疫印迹法分析细胞裂解产物（底部）。在三个独立的实验中也得到了类似的结果。
图8
图8
TRB3诱导内质网应激依赖性细胞死亡。(A类)用对照siRNA或TRB3 siRNA瞬时转染293细胞。48小时后，用2μg/ml衣霉素处理细胞，持续指定时间。通过结晶紫染色测量粘附细胞的百分比。右侧面板显示了用衣霉素处理48小时的染色细胞(B、 C类)用对照siRNA或TRB3 siRNA瞬时转染HeLa细胞（B）。用对照载体或Flag-TRB3瞬时转染293细胞（C）。48小时后，用2μg/ml衣霉素处理细胞24小时，或在没有或存在50μM zVAD的情况下不处理细胞。用台盼蓝染色法测定死亡细胞百分比。(D类)用对照siRNA或TRB3 siRNA瞬时转染HeLa细胞。48 h后，用2μg/ml衣霉素处理细胞24 h。通过DAPI染色检测凋亡细胞。右侧面板中的箭头表示凋亡细胞。在三个独立的实验中也得到了类似的结果。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Averous J，Bruhat A，Carraro V，Thiel G，Fafournoux P（2003）通过氨基酸限制诱导CHOP表达需要ATF4表达和ATF2磷酸化。生物化学杂志279:5288–5297-公共医学
    1. Barone MV、Crozat A、Tabaee A、Philipson L、Ron D（1994）CHOP（GADD153）及其致癌变体TLS-CHOP对诱导G1/S期阻滞具有相反的作用。基因Dev 8:453–464-公共医学
    1. Bowers AJ，Scully S，Boylan JF（2003）SKIP3是一种新型果蝇直系同源基因，在人类肿瘤中过度表达，并受缺氧调节。癌基因22:2823–2835-公共医学
    1. 巴西DP，Hemmings BA（2001）蛋白激酶B信号传导的十年：难以追踪的Akt。趋势生物化学科学26:657–664-公共医学
    1. Bruhat A、Averous J、Carraro V、Zhong C、Reimold AM、Kilberg MS、Fafournoux P（2002）CHOP和天冬氨酸合成酶基因转录激活的分子机制在氨基酸缺失或未折叠蛋白反应激活反应中的差异。生物化学杂志277:48107–48114-公共医学

出版物类型

MeSH术语