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.2005年3月；7(3):239-49.
doi:10.1016/j.ccr.2005.01.027。

雄激素消融减轻对前列腺/前列腺癌限制性抗原的耐受性

查尔斯·德雷克 1, 艾米·D·H·杜迪, 玛丽安·米哈利奥, 黄景泰, 埃林·凯莱赫, 索米亚·拉维, 爱德华·L·希普基斯, 达拉斯B Flies, 尤金·肯尼迪, 美晓龙, 帕特里克·W·麦加里, 李·科耶尔, 威廉·G·纳尔逊, 德鲁·M·帕多尔, 亚当·阿德勒
附属公司

雄激素消融减轻对前列腺/前列腺癌限制性抗原的耐受性

查尔斯·德雷克等。 癌细胞. 2005年3月.

摘要

为了了解T细胞对前列腺癌的反应，我们创建了以前列腺限制模式表达模型抗原的转基因小鼠，并将这些动物与发生自发性前列腺癌的TRAMP小鼠杂交。前列腺特异性CD4 T细胞的过继转移表明，在没有前列腺癌的情况下，前列腺大部分被忽视。肿瘤发生允许T细胞识别前列腺，但这种识别是耐受性的，导致增殖流产，最终导致系统水平的低反应性。雄激素消融术（转移性前列腺癌最常见的治疗方法）能够缓解这种耐受性，使前列腺特异性T细胞在接种疫苗后扩张并发展效应器功能。这些结果表明，前列腺癌的免疫疗法在雄激素消融后可能最有效。

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数字

图1
图1。Pro HA表达构建体
答：Pro-HA转基因，具有上述分泌HA（HAs）蛋白的结构。HA wt蛋白的图谱显示了ER信号序列（SS，氨基酸2-17）的位置，I-Ed日表位（氨基酸110–120，位于细胞外区域[ED]内），Kd日表位（氨基酸542-550，位于跨膜结构域[TM，氨基酸539-564]内）和细胞质结构域（CD）。HA蛋白的结构由一条粗黑线表示，该黑线表示保留的野生型蛋白部分。B类：HA wt和HA s蛋白的亚细胞定位。感染所示重组痘苗的P815细胞（或未感染作为背景染色对照[C]）的FACS直方图，直接（表面）或膜固定和渗透后（细胞内）进行HA染色。抄送：HA wt和HAs蛋白的免疫沉淀。用编码HA wt或HA s结构体或空表达质粒（C）的表达质粒瞬时转染COS-7细胞。48小时后，他们被贴上了[35S] 蛋氨酸1小时（脉冲），然后用过量的冷蛋氨酸培养3小时（chase）。脉冲期和追逐期结束后，收集细胞颗粒（P）和培养基上清液（S），使用抗HA单克隆抗体H-18进行免疫沉淀。通过SDS-PAGE对样品进行分析，分子量标准物的位置显示在左侧，HA蛋白的位置用每个放射自显影图右侧的箭头标记。显示了追踪放射自显影的短时间曝光（S）和长时间曝光（L）。
图2
图2。Pro-HA转基因小鼠表达前列腺限制性血凝素
答：使用HA特异性引物和探针对Pro-HA小鼠的指示组织进行定量RT-PCR。相对表达标准化为C3-HA前列腺（100），作为HA表达的阳性对照（Adler等人，1998年，2000年）。反应一式三份，重复两次。B类：Pro-HA小鼠表达前列腺HA蛋白。将来自指定小鼠的前列腺匀浆注射到NT受体的脚垫中，所述NT受体在前一天接受了初始6.5克隆型CD4细胞的过继转移。五天后，用流式细胞仪分析从排出的腘窝淋巴结制备的单细胞悬浮液。门控克隆型CD4细胞上CD44表达的直方图显示了虚线参考线左侧的平均荧光（MF）值。所示数据代表了几个重复数据。抄送：启动的克隆型CD8细胞渗入Pro-HA前列腺。表达Thy1.2同源标记的Pro-HA（右面板）和NT（左面板）小鼠接受了Thy1.1的过继转移+原始克隆4克隆型CD8细胞，同时接种vacc-HA，以激发克隆型CD八细胞。两周后，前列腺背叶冰冻切片用抗Thy1.1单克隆抗体（红色染色）染色，并用苏木精复染。显示的部分代表了几只老鼠。医生：在Pro-HA转基因小鼠中不会发生克隆型CD4细胞胸腺缺失。分析6.5 TCR单转基因、6.5×C3-HA和6.5×Pro-HA双转基因小鼠在CD4单阳性胸腺细胞和成熟脾脏CD4细胞上的克隆型TCR（即6.5）表达。虚线参考线表示背景6.5染色（由NT控件确定）。直方图代表多只小鼠。
图3
图3。前列腺肿瘤发生改变前列腺上皮抗原的表达
年龄匹配（6个月大）Thy1.2+NT、C3-HA、Pro-HA、TRAMP、Pro-HAx TRAMP和vacc-HA感染的NT（vacc-HA）受体接受了Thy1.1的过继转移+CFSE标记的原始克隆型CD4细胞，6天后从前列腺引流的主动脉旁淋巴结中恢复。答：克隆型CD4细胞的典型增殖反应（即CFSE溶解）。克隆型CD4细胞百分比（Thy1.1+和6.5+)虚线参考线左侧显示稀释CFSE荧光。B类：散点图显示肿瘤发生对克隆型CD4细胞增殖的影响。显示了单个小鼠CFSE稀释克隆型CD4细胞的百分比，水平线表示中值。p值采用非配对双尾t检验计算。抄送：干扰素-γ染色的代表性直方图，细胞因子阳性克隆型CD4细胞的百分比，以及这些阳性细胞的细胞因子表达水平（以平均荧光[MF]表示），分别显示在参考线上方和下方。
图4
图4。雄激素消融短暂增加前列腺上皮抗原的表达
在指定时间点去势的Pro-HA和Pro-HA×TRAMP小鼠接受Thy1.1的过继移植+CFSE标记的原始克隆型CD4细胞，6天后从前列腺引流的主动脉旁淋巴结中恢复。答：克隆型CD4细胞的典型增殖反应（即CFSE稀释液）。B类：散点图显示雄激素消融对克隆型CD4细胞增殖的影响，如图3B所示。抄送：干扰素-γ染色的代表性直方图，细胞因子阳性克隆型CD4细胞的百分比，以及这些阳性细胞的细胞因子表达水平（以平均荧光[MF]表示），分别显示在参考线上方和下方。医生：从完整和阉割的NT、vacc-HA感染的NT（vacc-HA）和C3-HA受体中回收的克隆型CD4细胞中CFSE稀释度的比较。
图5
图5。肿瘤发生可诱导前列腺上皮抗原的系统耐受性，而去势可减轻这种影响
答：同龄（6个月大）NT（n=10）、NT在第-1天去势（n=6）、C3-HA（n=10,10）、Pro-HA（n=10,1天去势）、TRAMP（n=9）、Pro-A×TRAMP（n=12）和Pro-HA×TRAMP在第-1天去势（n=6）Thy1.2+接受者接受了1×10的收养转移5未标记的Thy1.1+原始克隆型CD4细胞，2周后用1×106vacc-HA的pfu。对照NT小鼠接受T细胞，但不接受vacc HA（n=7）。六天后，克隆型CD4细胞（识别为CD4）的频率+和Thy1.1+)在前列腺非引流腋窝淋巴结中进行了测量。星号表示组与NT对照组有显著差异（p<0.05，非配对双尾t检验）。B类：细胞内IFN-γ染色的代表性直方图，显示细胞因子阳性克隆型CD4细胞的百分比。抄送：12至14周龄NT或ProHA×TRAMP小鼠用1×10过继转移7去势前1周检测克隆型CD4细胞。再过一周，用vacc-HA攻击动物，5天后收获。显示了来自无关（全身）LN的克隆型CD4细胞内IFN-γ染色的代表性直方图。
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