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1992年4月21日;31(15):3814-24.
doi:10.1021/bi00130a012。

大鼠肾脏中一种高分子量磷脂酶A2的动力学分析:二价金属依赖性酶在产物囊泡上的捕获

附属公司

大鼠肾脏中一种高分子量磷脂酶A2的动力学分析:二价金属依赖性酶在产物囊泡上的捕获

F戈马什奇等。 生物化学

摘要

大鼠肾脏高分子量磷脂酶A2催化1-棕榈酰-2-花生四烯酸-sn-甘油-3-磷酸胆碱囊泡水解动力学表现出异常行为。反应过程持续几分钟,然后仅在5-10%的可用底物水解后停止。添加更多酶而不是更多底物会导致新一轮水解。虽然这最初表明酶在周转过程中失活,但这种结论无法得到证实。在反应停止后,向反应中添加含有0.15M NaCl和牛血清白蛋白的缓冲液会导致脂肪分解的重新启动。酶不受反应产物的强烈抑制。尽管该酶不会不可逆地与由纯1-棕榈酰-2-花生酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱组成的囊泡结合,但它确实会不可逆地被捕获在含有临界摩尔百分比反应产物的囊泡上。这种捕获是反应进程停止的最有可能的解释。酶与1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱囊泡的结合以及这些囊泡中所含的1-硬脂酰-2-[3H]花生四烯醇-sn-磷酸胆碱的水解都需要产物的存在。此外,酶的捕获与催化转化无关。捕获对囊泡中脂肪酸的结构敏感,需要存在二价金属(Ca2+、Sr2+、Ba2+或Mg2+)。由于酶活性所需金属的浓度与促进捕获所需的量相关,因此建议金属的作用只是促进酶的界面结合。

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