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2004年12月15日;24(50):11346-55.
doi:10.1523/JNEUROSCI.3846-04.2004。

脑源性神经营养因子定位于苔藓纤维轴突的不同末端意味着对CA3锥体细胞的兴奋和前馈抑制的调节

附属公司

脑源性神经营养因子定位于苔藓纤维轴突的不同末端意味着对CA3锥体细胞的兴奋和前馈抑制的调节

史蒂夫·丹泽尔等。 神经科学

摘要

海马齿状颗粒细胞通过其苔藓纤维轴突突触前末端的特异性直接兴奋和间接抑制CA3锥体细胞。这种苔藓纤维通路在中枢神经系统中含有最高浓度的脑源性神经营养因子(BDNF),但BDNF是否定位于调节兴奋性和/或抑制性通路尚不清楚。为了定位BDNF,将绿色荧光蛋白转基因小鼠的共焦显微镜与BDNF免疫组织化学相结合。大约一半突触前颗粒细胞-CA3锥体细胞接触物中含有BDNF。此外,增强的神经元活性实际上使接触CA3锥体细胞的BDNF-免疫活性终末的百分比增加了一倍。令我们惊讶的是,在接触抑制神经元的苔藓纤维终末中也发现了BDNF。这些研究表明,苔藓纤维BDNF能够调节CA3吡喃细胞的直接兴奋性和间接前馈抑制性输入,并揭示癫痫发作活动增加了接触CA3锥体细胞的BDNF表达颗粒细胞突触前终末池。

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数字

图3。
图3。
BDNF-免疫活性巨型苔藓纤维束和苔藓光纤束。顶部,颗粒细胞中的GFP巨型苔藓纤维束(箭头)和苔藓光纤束(箭头所示)。中间的BDNF-免疫活性簇与巨大的囊泡共存,用箭头表示。箭头表示足足类中BDNF免疫反应阳性的区域(中间部分)。底部,合并了GFP和BDNF图像,双标签区域显示为蓝色。图像是通过所示MFB的几次共焦扫描的最大投影(显示最高强度的区域),但不包括布顿上方和下方的区域。比例尺,3μm。
图2。
图2。
复合共焦图像显示齿状颗粒细胞巨大苔藓纤维束(白色箭头)、齿状颗粒电池MFB filipodia(绿色箭头)、齿状颗粒细胞旁端(黄色箭头,EPT)、CA3b锥体细胞顶端树突和多刺赘生物(蓝色箭头,Th.Exc.)、,以及构成多余部分的单个脊椎头部之一(蓝色箭头,Th.Exc.脊椎头部)。比例尺,3μm。
图1。
图1。
共焦重建显示Thy1 GFP表达小鼠海马中GFP免疫反应。在这些切片中,许多齿状颗粒细胞被标记。可以看到它们的轴突投射到苔藓纤维通路(门,CA3上方的透明层)。图中还显示了单个标记的CA3锥体细胞。比例尺,250μm。
图4。
图4。
A类BDNF-免疫活性苔藓纤维通过终端。顶部,透明层中表达GFP的巨大苔藓纤维束(箭头)和顺便的末端(箭头)。圆形区域表示轴突内的BDNF-免疫活性颗粒。中间,BDNF免疫反应在顶部面板所示的相同区域。苔藓纤维束(箭头所示)和顶部旁路末端(箭头所述)为BDNF免疫阳性。底部旁路端子为负极。底部,合并了GFP和BDNF图像,双标签区域显示为蓝色。图像是通过所示的并行终端进行的多个共焦扫描的最大投影(显示最高强度区域),但不包括终端上方和下方的区域。B类在齿状颗粒细胞苔藓纤维轴突中发现BDNF-免疫活性颗粒。圆形区域表示轴突内的BDNF-免疫活性颗粒。GFP图像(顶部)是轴突的最大投影(显示最高强度的区域),BDNF图像(中部)是三个焦平面的投影,显示轴突内的BDNF粒子。比例尺:A类,3微米;B类,1微米。
图5。
图5。
单个焦平面的共焦扫描显示CA3锥体细胞棘状突起周围有BDNF免疫反应。左栏,Thorny累赘包绕BDNF-免疫活性簇。右栏,Thorny累赘脊柱头部周围有但不含BDNF免疫反应性(星号左侧)。GFP免疫反应阳性的多刺状排泄物显示在最上面一行;同一区域的BDNF免疫反应性显示在中间一行;合并后的图像显示在最下面的一行中。比例尺,2μm。
图6。
图6。
单焦平面扫描显示BDNF-免疫活性CA3锥体细胞棘状突起。A类,最大投影显示以0.4μm增量拍摄的六个焦平面的最高强度区域,如图所示B.B类在三个不同的焦平面上对同一个棘状赘肉进行三次扫描,每个焦平面相隔0.4μm。扫描显示BDNF免疫反应性与棘突多余的脊柱头部共定位。GFP免疫反应显示在顶行;同一区域的BDNF免疫反应性显示在中间一行;和合并的图像显示在底部行中。从左向右移动,注意箭头表示的脊椎的GFP和BDNF信号如何在右侧图像中同时消失。(在右图中,脊椎发出的GFP和BDNF信号变得模糊,因为它们不再位于焦平面上)。类似地,第二个脊椎(箭头)在左侧图像中刚刚失去焦点,在中间和右侧图像中与BDNF免疫反应同时出现。d、 枝晶。比例尺,2μm。
图7。
图7。
BDNF免疫反应定位于苔藓纤维通路中的星形胶质细胞。顶行,表达GFP的星形胶质细胞位于CA3b透明层。中行,BDNF-与顶行所示相同字段中的免疫活性。最下面一行,合并了GFP和BDNF图像,双标签区域显示为蓝色。A类,单个焦平面的共焦扫描显示星形胶质细胞胞体中的BDNF免疫反应性。B类,透明层星形胶质细胞在其过程中含有大量BDNF-免疫活性颗粒。C类,方框区域的放大视图如所示B类图像是20个焦平面共焦扫描的最大投影,以0.2μm的增量分隔。最大投影显示20次扫描中强度最高(最大)的区域。SR,辐射层;SL,透明层。比例尺:A类,5微米;B类,10微米;C类,2微米。
图8。
图8。
单焦平面的共聚焦扫描显示星形细胞过程包裹BDNF免疫反应簇。顶行,表达GFP的星形细胞过程。中行,BDNF免疫反应性与顶行所示相同。最下面一行,合并了GFP和BDNF图像。请注意星形胶质细胞的突起和BDNF-免疫活性簇之间紧密并置但可忽略的共定位(显示为蓝色)。比例尺,3μm。
图9。
图9。
左图,与盐处理对照组相比,匹罗卡品诱导癫痫持续状态(SE)3小时后48小时,BDNF-免疫活性巨MFB的百分比显著增加(C)。BDNF-免疫活性苔藓纤维束和苔藓光纤旁路终端(EPT)的数量没有显著增加。**第页<0.01,秩和检验。右图:与对照动物相比,癫痫持续状态后,邻近脊柱头部的CA3锥体细胞棘状赘生物中BDNF免疫反应阳性的脊柱头部的百分比显著增加。*第页<0.05,秩和检验。

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