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.2004年12月15日；1667(2):122-31.
doi:10.1016/j.bbamem.2004.09.007。

肾细胞质膜谷氨酰胺/氨基酸转运体重组为脂质体：功能表征、动力学和核苷酸活化

弗朗西丝卡·奥佩迪萨诺 1, 洛伦娜·波奇尼, 米歇尔·加卢奇奥, 玛丽安吉拉·卡瓦雷利, 塞萨尔·英迪维尔
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肾细胞质膜谷氨酰胺/氨基酸转运体重组为脂质体：功能表征、动力学和核苷酸活化

弗朗西丝卡·奥佩迪萨诺等。 Biochim生物物理学报. .
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摘要

用C12E8从大鼠肾心尖质膜（刷状缘膜）中溶解谷氨酰胺/氨基酸转运蛋白，并通过Amberlite XAD-4上的疏水色谱去除混合胶束中的洗涤剂，将其重组为脂质体。根据蛋白质浓度、去污剂/磷脂比率和通过单个Amberlite柱的传代次数对重组进行优化。重建的谷氨酰胺/氨基酸转运蛋白催化由外部而非内部Na+刺激的一级反转运反应。pH值为7.0时活性最佳。巯基试剂HgCl2、汞酰和对羟基汞苯甲酸盐以及氨基酸丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、蛋氨酸和缬氨酸强烈抑制转运，而氨基酸类似物甲基氨基异丁酸则无影响。谷氨酰胺、丙氨酸、丝氨酸、天冬酰胺、苏氨酸在蛋白质脂质体中可以从外到内、从内到外高效转运。半胱氨酸和缬氨酸优先从外向内移位。谷氨酰胺在转运蛋白外部和内部的Km分别为0.47和11 mM；这些值不受反基底类型的影响。转运蛋白功能不对称，以与天然膜相对应的方向单向插入蛋白脂质体膜。通过谷氨酰胺反转运的双底物动力学分析，发现了一种随机同步机制。谷氨酰胺反转运受到内部核苷三磷酸的强烈刺激，焦磷酸的刺激程度较低。重构的谷氨酰胺/氨基酸转运蛋白在功能上与ASCT2蛋白相对应。

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  • ASCT2是癌细胞中的主要丝氨酸转运体。
    Conger KO、Chidley C、Ozgurses ME、Zhao H、Kim Y、Semina SE、Burns P、Rawat V、Sheldon R、Ben-Sahra I、Frasor J、Sorger PK、DeNicola GM、Coloff JL。 Conger KO等人。 bioRxiv[预印本]。2023年10月11:2023.10.09.561530。doi:10.1101/2023.10.09.561530。 生物Rxiv。2023 PMID：37873453 免费PMC文章。 预打印。
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