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.2004年10月;37(4):610-3.
doi:10.2144/04374ST06。

基于实时定量PCR的转基因动物转基因拷贝数测定系统

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基于实时定量PCR的转基因动物转基因拷贝数测定系统

玛丽亚·鲍尔斯特等。 生物技术. 2004年10月.
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摘要

本文描述了一种快速准确的基于实时定量PCR的系统,用于测定转基因动物的转基因拷贝数。我们使用2(-deltadeltaCt)方法分析不同的转基因品系,而不需要事先通过Southern blot分析确定的对照样品。为了确定携带山羊β-乳球蛋白转基因的几种小鼠系中的转基因拷贝数,我们开发了一种TaqMan测定法,其中使用山羊基因组DNA样本作为校准器。此外,我们将胰高血糖素基因用作参考对照,因为该基因在物种之间高度保守,并且在山羊和小鼠中的扩增效率和敏感性相同。通过这种分析,我们提供了一种替代性的简单方法来确定转基因拷贝数,避免了传统和繁琐的印迹技术。与我们的结果相比,该分析的鉴别能力至少为6个拷贝,与印迹技术的局限性类似,当转基因拷贝数较高时,定量的准确性会降低。

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