Validation of housekeeping genes for normalizing RNA expression in real-time PCR

doi:10.2144/04371RR03

.2004年7月；37(1):112-4, 116, 118-9.

doi:10.2144/04371RR03。

实时PCR中规范化RNA表达的看家基因验证

基尔坦·德赫达¹, 吉姆·F·哈格特, 史蒂芬·A·巴斯廷, 玛格丽特·约翰逊, 格雷厄姆·鲁克, 阿利穆丁·祖姆拉

附属公司

PMID： 15283208
内政部： 10.2144/04371RR03号

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实时PCR中用于RNA表达正常化的管家基因的验证

基尔坦·德赫达等。生物技术. 2004年7月.

免费文章

.2004年7月；37(1):112-4, 116, 118-9.

doi:10.2144/04371RR03。

作者

基尔坦·德赫达¹, 吉姆·F·哈格特, 史蒂芬·A·巴斯廷, 玛格丽特·约翰逊, 格雷厄姆·鲁克, 阿利穆丁·祖姆拉

附属

¹英国伦敦皇家自由医学院。

PMID： 15283208
内政部： 10.2144/04371RR03号

摘要

使用实时PCR等技术分析RNA表达，传统上使用参考基因或管家基因来控制样本之间的误差。随着越来越清楚一些家政基因在某些生物样本中可能有很大差异，这种做法受到了质疑。我们使用实时逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）评估了健康人和结核病患者外周血单个核细胞培养物和全血中13个看家基因的表达水平。家政基因是从传统使用的基因和人类T细胞培养中报告的不变基因中选择的。没有发现任何常用的家政基因[例如，甘油醛-磷酸脱氢酶（GAPDH）]适合作为内部参考，因为它们具有高度的变异性（>30倍的最大变异性）。此外，之前在人类T细胞培养中发现的不变基因在RNA表达上也表现出很大的差异（最大变异>34倍）。血液中不变的基因在外周血单个核细胞培养中高度变异。我们的数据表明，RNA特异性人类酸性核糖体蛋白是最适合于正常化人类肺结核mRNA水平的看家基因。家政基因的验证对于特定的实验模型具有高度的特异性，并且是评估任何新模型的关键组成部分。

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