跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
。2004年8月18日；23(16):3397-407.
doi:10.1038/sj.emboj.7600323。 Epub 2004年7月15日。

体内外乳腺癌模型揭示了Pin1在肿瘤发生中的重要作用

格伯格·沃尔夫 1, 普里蒂·加格, Yih-Cherng Liou先生, 德克·伊格哈特, Kun Ping路
附属公司

体内外乳腺癌模型揭示了Pin1在肿瘤发生中的重要作用

格伯格·沃尔夫等。 欧洲工商管理硕士J。 。

摘要

某些Ser/Thr-Pro基序上的磷酸化是一种主要的致癌机制。脯氨酰异构酶Pin1进一步调节磷酸化Ser/Thr-Pro基序的构象和功能。Pin1在人类癌症中普遍过度表达，并与肿瘤发生有关。然而，Pin1在体内致癌中的作用尚不清楚。我们已经证明，尽管Pin1消融既不影响转基因表达也不影响乳腺发育，但在防止致癌Neu或Ras诱发小鼠cyclin D1和乳腺癌方面非常有效。此外，我们还开发了一种体外实验，以发现Neu或Ras小鼠的初级乳腺上皮细胞中有很大一部分在体内形成肿瘤之前很久就表现出各种恶性特性。重要的是，Pin1缺失有效地抑制了这些早期转化的特性，而cyclin D1的过度表达可以完全挽救Pin1的缺失。因此，Pin1对肿瘤发生至关重要，是一个有吸引力的抗癌靶点。我们的体外试验可用于研究遗传易感小鼠乳腺癌发展的早期事件。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
通过杂交获得的Pin1和转基因在正常乳腺和癌组织中的表达。(A–C)Pin1缺陷（Pin1−/−）小鼠（A）中不存在Pin1蛋白，但Pin1杂合子（Pin1+/-）小鼠（B）中仍保持在Pin1++水平。将来自具有指定基因型的同窝婴儿的乳腺和乳腺癌组织均质化，并在含有SDS的凝胶上分离等量的总蛋白并转移到膜上。将膜切成两块，用Pin1和微管蛋白（A，B）抗体进行免疫印迹分析，然后用Imagequant进行半定量。测定了四种不同动物乳腺的Pin1/微管蛋白比率，见（C）。请注意，c-Neu或Ha-Ras转基因小鼠中的Pin1水平是可变的，但通常高于非转基因小鼠（A，c）中的Pin 1水平。Pin1+/+和Pin1+/−小鼠之间的Pin1水平没有统计上的显著差异。(D、 E类)Pin1消融不影响转基因Ha-Ras或c-Neu的表达。对特定基因型乳腺的蛋白裂解物或组织切片进行免疫印迹（D）或用抗c-Neu或抗Ha-Ras抗体进行免疫染色（E）。注意，在每组分析的三到五只小鼠中，Pin1+/+和Pin1−/-小鼠的Neu或Ras水平没有统计上的显著差异。
图2
图2
Pin1消融术在预防MMTV-Neu或-Ras诱发的乳腺癌方面非常有效，但对-Myc无效。在启动子MMTV控制下过度表达活化c-Neu、Ras或Myc的转基因小鼠与Pin1−/−小鼠杂交，产生九种不同基因型的小鼠。对处女雌性进行了75周的观察。首次触诊时记录了乳腺癌。
图3
图3
Pin1消融可有效阻断Neu或Ras对细胞周期蛋白D1的诱导。用抗细胞周期蛋白D1或对照IgG免疫沉淀特定基因型的处女窝友的乳腺蛋白裂解物或组织切片，然后用抗细胞因子D1抗体免疫印迹(A类)或免疫组化抗细胞周期蛋白D1抗体(B类). 注意，每个受试组中至少有四至五只小鼠获得了类似的结果。
图4
图4
Pin1消融不影响3D培养中原发性MEC的分化。从形态和组织学上正常的非转基因乳腺中分离出原发性MEC(A类)或Neu转基因(B类)3-4个月大的Pin1+/+或Pin1−/−背景的同卵双胞胎。在胶原蛋白涂层板中培养3-5天后，将MEC作为单细胞悬浮液放置在重组基底膜（Matrigel）中，并在指定的时间点进行分析。在培养5天、10天和20天时拍摄相位图像，然后用抗E-钙粘蛋白抗体进行固定和共聚焦免疫荧光染色。
图5
图5
在Pin1+/+而非Pin1−/-遗传背景下，来自Neu或Ras转基因小鼠的MEC异常分化模式的特征。从具有不同遗传背景的同窝幼崽中分离出初级MEC，并在重组基底膜中进行3D培养20天。用相差显微镜分析菌落以揭示其形态(A、 F类)固定并用苏木精和伊红染色以显示组织学(B、 G公司)用抗E-钙粘蛋白抗体染色以显示细胞极性(C、 H（H）)，用抗α6整合素揭示基底膜的完整性(D类)抗Ki67抗体显示细胞增殖(E类). 根据这些分析，菌落分为三类，即“常规”、“不规则”和“类癌”。（A，F）中的箭头指向突入基质的细胞表面尖峰，而（B）中的箭指向分裂细胞。（A，B，F，G）×200的光学显微镜；（C–E，H），共聚焦荧光显微镜，×200。
图6
图6
Pin1+/+背景下Neu或Ras小鼠的非肿瘤原发性MEC表现为恶性表型，包括在裸鼠中形成肿瘤。(A–D)从具有不同遗传背景的同窝幼崽中分离出初级MEC，并在重组基底膜中进行3D培养20天。对每种基因型的三到五只小鼠进行检测，每只小鼠分为四组。在相位显微镜下对菌落进行分类和计数。每10000个接种细胞中不同类别的菌落数绘制为平均值±标准差P（P）-指示的值。NS，无显著差异。(E类)二次菌落形成。”在21天时，分别从Pin1+/+或Pin1−/−背景下的Neu或Ras MEC中提取常规“和”不规则“菌落，并进行胰蛋白酶消化，然后进行20天的多轮3D培养。(F类)仅在Pin1+/+，而非Pin1−/−背景下，来自Neu转基因小鼠的MEC菌落会在裸鼠中引发肿瘤。收集第21天的菌落，并将其重新悬浮在100μl MEGM/4%Matrigel中，然后将其皮下注射到雌性裸鼠体内，每个裸鼠重复注射一次（右侧和左侧）。在每组三只小鼠的六次注射中，三个肿瘤来自Neu/Pin1+/+菌落，但Neu/Pin 1−/-菌落没有产生任何肿瘤。
图7
图7
cyclin D1或其T286A突变体的表达可恢复Neu/Pin1−/−原发性MEC的恶性表型。来自Neu/Pin1−/−小鼠的初级MEC感染了用于对照的逆转录病毒cyclin D1或cyclin D1T286A型其次是Matrigel上的3D文化。通过Western blotting监测感染MEC中cyclin D1的表达（补充图S4）。第21天，通过相控显微镜分析菌落，以揭示其形态(A类)，用抗α6整合素抗体固定并染色，以测定基底膜的完整性(B类). 在相位显微镜下对菌落进行分类和计数(C类)。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Alt JR、Cleveland JL、Hannink M、Diehl JA（2000）《细胞周期蛋白D1核输出的磷酸化依赖性调节和细胞周期蛋白D依赖性细胞转化》。基因Dev 14:3102–3114-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Arber N，Doki Y，Han EK，Sgambato A，Zhou P，Kim NH，Delohery T，Klein MG，Holt PR，Weinstein IB（1997）对细胞周期蛋白D1的反义抑制人类结肠癌细胞的生长和致瘤性。癌症研究57:1569–1574-公共医学
    1. Ayala G，Wang D，Wulf G，Frolov A，Le R，Wheeler T，Sowadski JM，Lu KP，Bao L（2003）Pin1是前列腺癌新的预后标志物。癌症研究63:6244–6251-公共医学
    1. Bao L，Sauter G，Sowadski J，Lu KP，Wang D（2004）脯氨酰异构酶Pin1在人类癌症中的普遍过度表达。《美国病理杂志》164:1727–1737-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Barcellos-Hoff MH，Aggeler J，Ram TG，Bissell MJ（1989）重建基底膜上原代乳腺培养物的功能分化和肺泡形态发生。开发105:223–235-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

MeSH术语