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.1992年9月1日;208(2):475-80.
doi:10.1111/j.1432-1033.1992.tb17210.x。

大肠杆菌天冬酰胺酶II的定点突变。催化不需要三种组氨酸残基

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大肠杆菌天冬酰胺酶II的定点突变。催化不需要三种组氨酸残基

韦纳等。 欧洲生物化学杂志. .
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摘要

使用位点特异性诱变将大肠杆菌天冬酰胺酶II(EcA2)的三个组氨酸残基替换为其他氨基酸。对以下酶变体进行了研究:[H87A]EcA2、[H87L]EcA2,[H87K]EcA2、[H183L]EcA2和[H197L]EcA2。这些突变均未显著影响L-天冬氨酸β-羟肟酯的Km或天冬氨酸酯结合受损。L-Asn、L-Gln和L-天冬氨酸β-羟肟酸的相对活性降低到相同程度,剩余活性超过野生型值的10%。这些数据不支持先前的一些报告,这些报告表明组氨酸残基对催化作用至关重要。修饰酶的光谱特性使得天冬酰胺酶II的1H-NMR谱中组氨酸共振的归属明确。先前显示的组氨酸信号在天冬氨酸结合后消失是由于His183,而不是高度保守的His87。事实上,[H183L]EcA2具有正常活性,但在尿素存在下稳定性大大降低,这表明His183对天然天冬酰胺酶四聚体的稳定非常重要。1H-NMR和荧光光谱表明His87位于蛋白质内部,可能与活性位点相邻。

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