跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2004年7月1日；18(13):1565-76.
doi:10.1101/gad.296004。 Epub 2004年6月15日。

鬣蜥编码一种新的锌指蛋白，其螺旋结构域对斑马鱼胚胎中的刺猬信号转导至关重要

克里斯提安·沃尔夫 1, 苏迪普托·罗伊, 凯瑟琳·刘易斯, 海克·绍尔特, Gerd Joerg Rauch公司, 安妮特·科恩, 克里斯蒂安·威勒, 罗伯特·盖斯勒, 帕斯卡·哈夫特, 菲利普·英格姆
附属公司

鬣蜥编码一种新的锌指蛋白，其螺旋结构域对斑马鱼胚胎中的刺猬信号转导至关重要

克里斯提安·沃尔夫等。 基因开发. .

摘要

刺猬家族脂质修饰分泌糖蛋白的信号传导在动物发育和人类的模式形成中起着基本作用；Hedgehog通路成分的功能障碍经常与多种先天性异常和癌症相关。刺猬靶基因的转录调控由Gli锌指转录因子的成员介导。Gli激活物（Gli（act））和阻遏物（Gli（rep））形式的相对核浓度及其核质转运似乎是靶基因表达的关键决定因素。尽管如此严格的Gli活性控制对于确保适当水平的通路激活至关重要，但对这些过程的调控机制仍不完全了解。在这里，使用遗传分析，我们表明斑马鱼鬣蜥基因产物作用于平滑蛋白的下游，以调节发育中胚胎体节中的Gli活性。位置克隆显示，鬣蜥编码Dzip1的斑马鱼直系同源物，Dzip1是一种新的锌指/卷曲线圈结构域蛋白，我们发现它可以以与Hedgehog通路活性相关的方式在细胞质和细胞核之间穿梭。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
Hh信号异常和肌肉细胞类型的特异性错误igu公司胚胎。(A类)ptc1型野生型胚胎近轴细胞（箭头）和神经板（星号）中的表达。(B类)ptc1型在类似阶段的表达igu公司突变胚胎。注意近轴细胞（小箭头）和神经板（星号）的表达减少，近轴中胚层的异位表达（长箭头）。(C类)ptc1型野生型胚胎肌节中的表达。(D类)中的扩展ptc1型在肌节中的表达igu公司突变胚胎。(电子)用抗低MyHC抗体标记的野生型胚胎最前面体节的SSF模式。(F类)脊髓前体SSF减少igu公司用抗低MyHC抗体标记的突变胚胎。(G公司)用抗Eng抗体标记的野生型胚胎内侧肌节中的MP（长箭头）和MFF（短箭头）。(H（H）)内侧肌节的MP（长箭头）和MFF（短箭头）igu公司用抗Eng抗体标记的突变胚胎。(我)用抗Eng（红色）和抗Prox1（绿色）抗体标记的野生型胚胎的内侧肌节中的MP和MFF。Prox1表示为所有慢交换光纤、SSF和MP。(J型)内侧肌节的MPs和MFFigu公司用抗Eng（红色）和抗Prox1（绿色）抗体标记的突变胚胎。(A、 B类)1-2体节期背视图。(C–J型)24 hpf期胚胎的侧视图。除非另有说明，否则本图和所有后续图中描绘的胚胎均朝向左侧前方。
图2。
图2。
igu公司突变体对Hh信号活动的调节不敏感。(A类)一个Shh过度表达的野生型胚胎显示，标记有抗Eng（绿色，n个= 51/57). (B类)A Shh过度表达igu公司用抗Eng标记的胚胎显示肌节细胞命运没有改变(n个= 23/23). (C类)图中描绘的胚胎B类，显示核定位β-半乳糖苷酶（红色）示踪剂，其mRNA与Shh的mRNA同时注射，以确保注射的mRNA的正确分布。(D类)用抗Eng抗体组织化学显示的野生型胚胎肌节中Eng表达模式。显示了MP（长箭头）和MFF（短箭头）。(电子)肌节中Eng的表达igu公司ts294e型突变胚胎。注意MFF的扩展（短箭头）和MP的减少（长箭头）。(F类)子宫肌节中Eng表达的相似模式igu公司tm79a（tm79a）突变胚胎。(G公司)子宫肌节完全无Eng表达苏突变胚胎。(H（H）)igu公司-肌节中Eng表达的相似模式syu；igu公司ts294e型双突变体胚胎。显示MP（长箭头）和MFF（短箭头）。(我)子宫肌节完全无Eng表达西姆突变胚胎。(J型)igu公司-肌节中Eng表达的相似模式西米古ts294e型双突变体胚胎。显示MP（长箭头）和MFF（短箭头）。(K（K）)用环胺处理的野生型胚胎的肌节全部Eng表达缺失(n个= 12/12). (L（左）)Eng表达式在igu公司tm79a（tm79a）环胺处理后的突变胚胎(n个= 7). 所有面板均显示24 hpf阶段胚胎的侧视图。
图3。
图3。
这个igu公司突变对PKA具有上位性。(A类)注射编码cPKA的mRNA并用抗Eng抗体标记的野生型胚胎显示肌节中Eng表达缺失(n个= 38/47). (B类)cPKA过表达在igu公司突变胚胎(n个= 17/21). (C类)异位表达ptc1型野生型胚胎对dnPKA过度表达的反应(n个=34/34，参见图1A）。(D类)的模式ptc1型表达式igu公司dnPKA过表达后胚胎保持不变(n个=16/16，参见图1B）。(A、 B类)24 hpf胚胎的侧视图。(C、 D类)1-2个体节期胚胎的背视图。
图4。
图4。
Igu功能对正常的Gli活性至关重要。(A类)用抗MyHC慢速抗体进行组织化学染色显示，与野生型胚胎5–10体节相对应的肌节中的慢速肌纤维。肌节内侧区的MP细胞如箭头所示。(B类)类似标记的慢纤维igu公司突变胚胎。(C类)慢纤维几乎完全不存在于肌节igu；直接转矩控制双突变体胚胎。中的SSF、MP和MFF模式直接转矩控制突变体本身与野生型胚胎难以区分（Wolff等人，2003年）。(D类)安igu；直接转矩控制用抗Eng抗体标记的双突变胚胎显示肌节完全缺乏Eng表达。(电子)安igu；直接转矩控制/+胚胎用慢MyHC抗体染色，显示SSF数量减少，MP纤维内侧束缺失。(F类)肌节中完全没有MP-特异性高水平Eng表达igu；直接转矩控制/+胚胎。一些MFF中显示了Eng的剩余表达（箭头）。(G公司)A类约特/+用抗低MyHC抗体标记的杂合胚胎显示出一种基本上类似野生型的慢肌纤维模式，但MP细胞的内侧束偶尔丢失（箭头所示）。(H（H）)完全缺失的所有慢肌纤维从肌节igu；约特/+胚胎。(我)注射了gli2型MO，并用抗Eng（红色）和抗Prox1（绿色）抗体标记，显示肌瘤表面MP-like细胞定位错误（箭头，n个= 14/21). (J型)同一胚胎在肌节内侧区完全缺乏MP细胞，MFF数量增加（参见图1I）。(K（K）)安igu公司胚胎注射gli2型MO和标记有anti-Eng（红色）和anti-Prox1（绿色）的标记，显示SSF数量减少，肌瘤表面MP-like细胞定位错误（箭头，n个= 9/12). (L（左）)同一胚胎在肌节内侧区完全缺乏MP细胞，MFF中Eng表达进一步增加（见图1J）。所有面板均显示了24 hpf阶段胚胎的侧视图。
图5。
图5。
(A类)注射了苏（付）MO表示英语MFF数量增加（短箭头，n个=15/26，参见图2D）。议员不受影响（长箭头）。(B类)A类似注入igu公司表达Eng的MFF数量显著增加的突变胚胎（短箭头，n个= 10/14). MP不受影响（长箭头，参见图2E、F）。(C类)A类苏（付）用抗低MyHC抗体标记的mRNA注射野生型胚胎显示正常的慢肌纤维模式(n个= 22/22). (D类)一个用抗Eng抗体染色的类似操作的同胞胚胎，显示肌节中Eng表达的正常模式(n个= 18/18). 显示了MP（长箭头）和MFF（短箭头）。(电子)A类苏（付）注射的信使核糖核酸igu公司用抗低MyHC抗体标记的突变胚胎显示慢肌纤维显著丢失(n个=10/14，参见图4B）。(F类)A类似注入igu公司胚胎显示完全无MPs，在一些MFF中残留Eng表达（箭头，n个=16/19，参见图2E）。
图6。
图6。
的位置克隆igu公司轨迹。(A类)一张遗传图igu公司LG 6上的位点，显示SSLP（z）、SSCP和SNP标记的位置、基因组克隆以及跨越区间的预测ORF的顺序。显示了带有左（北，绿）和右（南，红）方向标记的重组子数量和重组频率（以厘米为单位[cM]）。(B类)野生型胚胎的LFP细胞表达飞行kd4。请注意飞行kd4在LFP以及LFP两侧的内侧底板（MFP）中表达。(C类)在一个igu公司突变胚胎，LFP细胞缺失飞行kd4表达仍然局限于单行MFP细胞。(D类)修复的补丁飞行kd4表达LFP细胞（箭头）igu公司注射BAC D13的突变胚胎(n个= 16/25). (电子)肌节中表达Eng的肌肉细胞的野生型样模式igu公司胚胎注射来源于全长野生型的合成信使核糖核酸igu公司cDNA在5′端与编码GFP的cDNA融合(n个=19/23，参见图2D，E）。(F类)注射编码突变Igu蛋白的mRNA的野生型胚胎，对应于igu公司ts294e型用GFP标记N末端的等位基因显示Eng表达模式无变化(n个= 50). (G公司)Eng表达模式在igu公司ts294e型注射相同突变mRNA的胚胎(n个= 14). (H（H）)野生型Igu蛋白的图示。深色和浅灰色阴影区域分别表示人类DZIP1蛋白的保守性>50%和>25%（另请参见补充图1）。N端锌指用浅蓝色表示，C端卷曲线圈域用深蓝色表示。蛋白质在三个不同区域截断的大致位置igu公司显示了等位基因以及交替剪接外显子（黑盒）的位置（另请参见补充图1）。为清楚起见，未描述N端锌指周围的假定NES、NLS和线圈域。(我)野生型Igu N末端标记有GFP（绿色方框）的图示。(J型)C端截断Igu的图示，对应于igu公司ts294e型突变，N末端用GFP（绿色框）标记。(B–D类)22个体节期胚胎的腹部视图。(E–G公司)24 hpf胚胎的侧视图。
图7。
图7。
这个igu公司表型表现为完全丧失功能。(A类)前四个编码外显子的图示igu公司基因、外显子接合处的相关核苷酸（和相应的氨基酸）序列以及两个MO识别的剪接位点。(B类)注射剪接MO1和MO2组合的野生型胚胎显示igu公司-肌节中Eng表达的相似模式(n个=22/27，参见图2D–F）。(C类)类似注射的野生型胚胎经环胺治疗后对Eng表达模式无影响(n个=10/12，参见图2K，L）。
图8。
图8。
Igu蛋白的亚细胞定位，但不包括igu公司基因，受Hh活性调节。(A类)母亲的模式igu公司mRNA在16细胞期胚胎动物细胞中的分布。(B类)合子的统一模式igu公司mRNA在12体节期胚胎中线和体节的分布。(C类)均匀图案igu公司24hpf胚胎肌节mRNA转录。(D类)GFP标记的野生型Igu在2体节期野生型胚胎近轴中胚层细胞中的排他性细胞质分布(n个= 10/10). 这种嵌合蛋白能够完全替代野生型Igu活性和拯救igu公司突变胚胎（图6E）。(电子)GFP标记的主要核聚积igu公司ts294e型Igu突变型(n个= 10/10). (F类)GFP标记的野生型Igu对PKA活性失活的核转位反应(n个= 12/15). (G公司)GFP标记的核聚积igu公司ts294e型Igu突变型在PKA活性失活时保持不变(n个= 10/10). (H（H）)GFP标记的核聚积igu公司ts294e型Igu的突变形式在Su（fu）过表达时保持不变(n个= 10/10). (I–M公司)GFP图像的叠加，如D–H型用TOPRO-3染色后，在相同的制剂中突出细胞核。A、 B类、和D–M日是背面观点；C类是横向的。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Blagden C.、Currie P.D.、Ingham P.W.和Hughes S.M.，1997年。声波刺猬介导了对斑马鱼慢肌的Notochord诱导。基因与发育11:2163-2175。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Brand M.，Heisenberg，C.P.，Warga，R.M.，Pelegri，F.，Karlstrom，R.O.，Beuchle，D.，Picker，A.，Jiang，Y.J.，Furutani-Seiki，M.，van Eeden，F.J.等人，1996年。斑马鱼胚胎发生期间影响中线发育和一般体型的突变。发展123:129-142。-公共医学
    1. Buttitta L.，Mo，R.，Hui，C.C.和Fan，C.M.，2003年。Gli2和Gli3的相互作用及其在介导Shh依赖性硬化瘤诱导中的需求。开发130:6233-6243。-公共医学
    1. Caspary T.、Garcia-Garcia M.J.、Huangfu D.、Eggenschwiler J.T.、Wyler M.R.、Rakeman A.S.、Alcorn H.L.和Anderson K.V.，2002年。小鼠调度同源物1是长程Hh信号传导所必需的，但不是近端肾上腺素信号传导。货币。生物12:1628-1632-公共医学
    1. Chen W.、Burgess，S.和Hopkins，N.2001。对斑马鱼平滑突变体的分析揭示了刺猬活动的保守和发散功能。开发128:2385-2396。-公共医学

出版物类型

MeSH术语

关联数据

赠款和资金

LinkOut-更多资源