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.2004年4月13日；101(15):5610-5.
doi:10.1073/pnas.0308054101。 Epub 2004年3月25日。

记忆T细胞上IL-7受体的选择性表达可识别CD40L依赖的早期CD8+记忆T细胞亚群

凯萨琳娜·胡斯特 1, 维雷娜·布什, 马蒂亚斯·希曼, 凯瑟琳·林克曼, Kristen M Kerksiek, 赫尔曼·瓦格纳, 德克·布施
附属公司

记忆T细胞上IL-7受体的选择性表达可识别CD40L依赖的早期CD8+记忆T细胞亚群

凯瑟琳·哈斯特等。 美国国家科学院程序. .

摘要

最近的几项研究表明，初始启动期的T辅助细胞依赖性事件是产生CD8（+）T细胞介导的保护性免疫所必需的。这种现象的潜在机制尚未确定，主要是因为在免疫反应的早期阶段难以研究记忆T细胞或其前体细胞群。我们确定IL-7受体（CD127）的表面表达是长寿记忆T细胞的标记，最重要的是，在体内启动后的早期，可以区分记忆和效应T细胞。CD127和CD62L的表面染色组合进一步在两个功能不同的记忆细胞亚群之间分离，这两个细胞亚群与最近被描述为中央记忆T细胞（CD127（高）和CD62L（高））和外周效应记忆T细胞的细胞亚群相似（如果不相同的话）。使用这种新的记忆性T细胞分析工具，我们证明，在缺乏T细胞帮助或CD40L的情况下启动CD8（+）T细胞可特异性改变效应性记忆性T淋巴细胞亚群的生成，这似乎对即时记忆反应和长期维持有效的保护性免疫至关重要。我们的数据揭示了一种独特的策略，即在免疫反应早期获取有关长期保护性免疫质量的信息，这一发现可应用于各种临床环境，包括快速监测疫苗接种成功率。

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数字

图1。
图1。
CD127（IL-7R）表面表达作为记忆性T细胞的标记物。(一)一组BALB/c小鼠被亚致死剂量（≈0.1×LD）感染50)WT的Lm（磅）其次是继发感染（≈10×LD50)5周后。脾细胞的代表性点图（在活CD8上门控+T细胞）用H2-K染色d日/LLO公司91–99四聚体(年轴）和用于CD127表面表达(x个轴）显示了主要过程中指示的时间点(上部)和召回(下部)回应。(b条)在初级效应器（感染后7天）和记忆（感染后35天）阶段，分离不同器官的淋巴细胞。代表性直方图在CD8上选通+和H2-Kd日/LLO公司91–99四聚体阳性细胞，显示CD127染色（开放）和未染色对照（填充）。(c（c）)绝对数的动力学(年轴）CD127高（填充）和低（开放）表达CD8+和H2-Kd日/LLO公司91–99四聚体阳性细胞；每个时间点六只老鼠。(d日)CD127高表达和低表达CD8+，H2-Kd日/LLO公司91–99多聚体阳性细胞直接分类体外10天后李斯特菌属感染。检测抗CD3刺激后羧基荧光素琥珀酰酯类标记细胞的增殖情况；CD127型高的（粗体行）或CD127低的（细线）细胞。
图2。
图2。
过继性转移研究表明，长寿记忆T细胞只存在于CD127阳性细胞室中。CD127高表达和低表达CD8+，H2-Kd日/LLO公司91–99直接分选BALB/c Thy1.1小鼠的多聚体阳性细胞体外10天后李斯特菌属感染。将细胞转移到原始BALB/c（Thy1.2）受体小鼠中，3周后对脾和肺进行供体细胞染色（CD8+和Thy1.1+)。(一)条形图总结了Thy1.1绝对数的数据+CD127转移后每个器官的细胞数高的细胞（开放）或CD127低的（填充）T细胞。(b条)数据采集和数据呈现与中所述相同一感染后5天，10三 Lm（磅）.
图3。
图3。
CD127/CD62L双重染色区分不同CD8+T细胞亚群；在人类身上也可以发现类似的结果。CD8双重染色+，H2-Kd日/LLO公司91–99表面表达CD62L的多聚体阳性细胞(年轴）和CD127(x个轴）感染后Lm（磅）; 指出了象限中各亚群的相对百分比。CD127型低的/CD62L型低的，CD127高的/CD62L型低的和CD127高的/CD62L型高的直接对亚群进行排序体外12天后李斯特菌属感染并转移到不同的功能检测中。在靶细胞和LLO存在的情况下培养分选细胞后，评估细胞溶解活性91–99肽（方形）或无肽（圆形）。细胞内细胞因子染色体外分类LLO91–99-对IL-2进行了特定的亚群（如上所示）(顶部)，干扰素-γ(中部)和肿瘤坏死因子α(底部)简短之后在体外用LLO重新刺激91–99肽（黑色区域；白色区域代表未刺激的对照）；显示了细胞因子阳性细胞的百分比。
图4。
图4。
MHC II–/–和CD40L–/–小鼠的记忆反应受损与不同T细胞亚群生成的早期缺陷相关。(一)重量C57BL/6(左侧)和MHC II缺陷(赖特)小鼠感染了亚致死剂量的表达卵清蛋白的卵清蛋白Lm（磅）; CD8的点图+，H2-Kb条/SIINFEKL阳性T细胞CD62L染色(年轴）和CD127(x个axis）显示原发感染后10天。(b条)再次感染后3天脾脏中的活菌数（≈10×LD50; 初次感染后5周）李斯特菌属CD40L–/–（填充）和WT BALB/c（打开）中；n个=每组3人。(c（c）)LLO动力学91–99-H2-K测定的特异性T细胞d日/LLO公司91–99CD40L–/–（•）或WT BALB/c小鼠的四聚体染色(□) 一次之后（0.1×LD50)和回忆感染（2.5×LD50; 初次感染后5周）Lm（磅）; 每个时间点三只老鼠。(d日)WT BALB/c小鼠和CD40L–/–小鼠在召回感染期间通过饮用水接受BrdUrdLm（磅）（2.5×LD50; 原发感染后5周）；点图显示BrdUrd合并(x个轴）在CD8中+H2-K染色的T细胞d日/LLO公司91–99四聚体(年轴），在第5天进行染色。(e（电子）)CD8双重染色+，H2-Kd日/LLO公司91–99CD40L–/–BALB/c小鼠CD62L四聚体阳性细胞(年轴）和CD127(x个轴）原发性感染后10天（WT BALB/c对照见图2c（c）)。(如果)LLO绝对数91–99初次感染10天后，通过CD62L和CD127染色测定脾脏中四聚体阳性T细胞亚群。
图5。
图5。
T细胞启动后早期T细胞亚群中CD40L依赖性变化被传递到随后的记忆T细胞池。(一)在初次感染后35天，从WT BALB/c小鼠或CD40L–/–的肺部、脾脏和LN中分离出淋巴细胞Lm（磅）（0.1×LD50)。短时间后进行细胞内IFN-γ染色在体外存在LLO时的再刺激91–99识别具有即时效应功能的T细胞的肽。点图显示不同器官的代表性结果（如图所示）；数字表明产生IFN-γ的细胞的总频率。第一行条形图总结了干扰素-γ-产生频率、LLO的数据91–99-CD8内的特异性T细胞+隔间；右边的一行条形图总结了产生IFN-γ的LLO绝对数的数据91–99-不同器官中的特异性T细胞[CD40L–/–（填充）和WT BALB/c（开放）；n个=每组3人]。(b条)LN细胞在原发性感染后35天采集，如一; LLO公司91–99-通过MHC多聚体染色检测特异性T细胞（斑点图，年轴）以及CD8和CD62L的涂层（点图，x个轴）曲面表达式。显示了CD8上选通的单元格的代表性点图+T细胞；指示每个象限内的频率。左边的条形图总结了CD8中MHCS多聚体和CD62L阳性T细胞的频率数据+隔间；右边的一行条形图总结了LLO绝对数的数据91–99/氢-Kd日LN中的多聚体阳性T细胞（CD40L–/–（填充）和WT BALB/c（开放）；n个=每组3个）。
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