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.2004年2月;67(2):136-44.
doi:10.1002/mrd.10385。

发育正常和发育不全牛双细胞胚胎母体mRNA表达差异分析

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发育正常和发育不全牛双细胞胚胎母体mRNA表达差异分析

特鲁迪博览会等。 摩尔再现偏差. 2004年2月.

摘要

本研究的主要目的是鉴定与胚胎发育能力相关的mRNA转录物。牛在生长阶段积累的mRNA转录物、核糖体和蛋白质被用来维持成熟、受精和最初的细胞周期分裂,直至8至16细胞阶段。早期分裂的哺乳动物受精卵比晚期分裂的受精卵更有可能发育到囊胚阶段,因此反映了它们起源的卵母细胞的内在质量。我们将这一成熟的模型与广泛筛选不同生物群体差异基因表达的技术相结合,用于哺乳动物卵母细胞发育能力的回顾性测定。从屠宰场卵巢表面可见的卵泡中回收未成熟卵丘-卵母细胞复合体,清洗,并进行常规体外成熟和受精。从授精后24到42小时,每隔3小时从培养物中取出两个细胞胚胎(pi)。鉴定出两组双细胞胚胎;那些早期开裂(27 hpi之前)和晚期开裂(33 hpi之后)。对来自两个群体的cDNA进行抑制性消减杂交,然后亚克隆差异表达的扩增子并测序。使用BLAST算法将序列提交给NCBI的非冗余和表达序列标签(EST)数据库。选择三个在早期分裂合子中被确定为上调的候选基因的差异表达进行进一步研究;组蛋白H3、细胞周期蛋白B1和GDF-9B。使用定量实时PCR,我们发现组蛋白H3A在分裂最早的胚胎中显著更丰富。

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