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.2004年3月;286(3):G467-78。
doi:10.1152/ajpgi.00344.2003。 Epub 2003年10月16日。

以氨基酸转运体ATB0/ASCT2为靶点的可诱导反义RNA诱导人肝癌细胞凋亡

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以氨基酸转运体ATB0/ASCT2为靶点的可诱导反义RNA诱导人肝癌细胞凋亡

布莱恩·C·富克斯等。 美国生理学杂志胃肠测试肝脏生理学. 2004年3月.
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摘要

氨基酸转运蛋白B(0)/ASC转运蛋白2(ATB(0)/ASCT2)负责人肝癌细胞中大多数谷氨酰胺的摄取。由于该转运体在正常肝细胞中不表达,我们假设其表达对人类肝癌细胞的生长是必要的。为了验证这一假设,在合成类固醇米非司酮的转录控制下,用可诱导的1.3-kb ATB(0)/ASCT2反义RNA表达质粒稳定转染Sloan Kettering肝癌(SK-Hep)细胞。与对照组相比,单层培养物中诱导的反义RNA表达在24小时后使ATB(0)/ASCT2 mRNA水平降低73%,谷氨酰胺转运率降低65%,导致48小时后细胞数量减少98%,活性染料和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记染色和聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)裂解。转运体敲除也显著增加caspase-2和-9的活性,略微增强caspase-8的活性,并显著增加ASCT1 mRNA水平,可能是一种无效的代偿反应。通过转运蛋白沉默诱导的细胞凋亡并不是由双链RNA依赖性蛋白激酶R(PKR)途径引起的。相比之下,谷氨酰胺缺乏也会导致细胞凋亡,但时间动力学较慢,刺激胱天蛋白酶-2和-3,但不刺激胱天蛋白酶-8或-9的活性,并导致相当大的PARP切割。因此,ASCT2抑制所产生的促凋亡作用超越了单纯的谷氨酰胺饥饿。我们得出结论,ATB(0)/ASCT2的表达对SK-Hep细胞的生长和生存是必要的,并建议进一步探索其作为人类肝癌的选择性靶点。

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