Effects of human metapneumovirus and respiratory syncytial virus antigen insertion in two 3' proximal genome positions of bovine/human parainfluenza virus type 3 on virus replication and immunogenicity

doi:10.1128/jvi.77.20.10819-10828.2003

.2003年10月；77(20):10819-28.

doi:10.1128/jvi.77.20.10819-10828.2003。

人偏肺病毒和呼吸道合胞病毒抗原插入牛/人3型副流感病毒两个3'近端基因组位置对病毒复制和免疫原性的影响

罗德里克·S·唐¹, 珍妮·希克利, 米娅·麦克菲尔, 菲奥娜·费尔南德斯, 利纳斯·比查, 约书亚·斯佩特, 罗恩·A·M·福奇, 阿尔伯特·D·M·E·奥斯特豪斯, 理查德·斯佩特, 奥雷莉亚·A·哈勒

附属公司

PMID： 14512532
预防性维修识别码： PMC224993型
内政部： 10.1128/jvi.77.20.10819-10828.2003年10月10日

人偏肺病毒和呼吸道合胞病毒抗原插入牛/人3型副流感病毒两个3'近端基因组位置对病毒复制和免疫原性的影响

罗德里克·S·唐等。 J维罗尔. 2003年10月.

.2003年10月；77(20):10819-28.

doi:10.1128/jvi.77.20.10819-10828.2003。

作者

罗德里克·S·唐¹, 珍妮·希克利, 米亚·麦克菲尔, 菲奥娜·费尔南德斯, 利纳斯·比查, 约书亚·斯佩特, 罗恩·A·M·福奇, 阿尔伯特·D·M·E·奥斯特豪斯, 理查德·斯佩特, 奥雷莉亚·A·哈勒

附属

¹MedImmune Vaccines，Inc.，美国加利福尼亚州山景城，邮编94043。

PMID： 14512532
预防性维修识别码： PMC224993型
内政部： 10.1128/jvi.77.20.10819-10828.2003年

摘要

用一株携带人类PIV3融合基因（F）和血凝素-神经氨酸酶基因（HN）的减毒活牛副流感病毒3型（PIV3）作为病毒载体，表达两种人类病原体（人偏肺病毒（hMPV）和呼吸道合胞病毒（RSV）的表面糖蛋白。RSV和hMPV都是副粘病毒，可导致儿童、老年人和免疫缺陷患者的呼吸道疾病。几十年来，已知RSV会导致幼儿急性下呼吸道感染，通常导致住院，而hMPV只是最近才被确定为一种新的人类呼吸道病原体。本研究评估了牛/人PIV3表达三种不同外源性跨膜表面糖蛋白并诱导保护性免疫反应的能力。副粘病毒的RNA依赖性RNA聚合酶与病毒RNA基因组3'端的一个位点结合，启动病毒基因的转录。病毒基因的基因组位置决定了其基因表达水平。启动子近端基因转录频率最高，由于每个基因连接处的转录减弱，每个下游基因转录频率较低。副粘病毒的这一特征是使用PIV3载体通过在病毒RNA基因组的3'末端1或2位插入外源病毒基因来利用的。这些位置预计会产生高水平的外源病毒蛋白表达，刺激保护性免疫反应。用仓鼠模型获得的免疫原性和保护性结果表明，牛/人PIV3可用于生成二价PIV3/RSV或PIV3/hMPV候选疫苗，将进一步评估其在灵长类动物中的安全性和有效性。

PubMed免责声明

数字

**图1。**
b/h PIV3 RNA基因组的示意图，作为插入RSV或hMPV表面糖蛋白基因的载体主干。PIV3基因组位置1或2处的RSV F、RSV G和hMPV F基因插入用灰色方框表示。通过使用平均II限制性内切酶位点，其在PIV3基因组中的nt104处或在平均公元1774年第二遗址。插入的转录单位包含bPIV3 N-P基因间区域，其基因停止和启动序列用于插入盒下游基因的转录。

**图2。**
（A）以0.1的MOI在Vero细胞中进行b/h PIV3/RSV F1、F2、G1、G2和b/h PIV 3的多周期生长曲线。（B） MOI为0.1时Vero细胞中B/h PIV3/hMPV F1、F2和B/h PIV 3的多周期生长曲线。在0、24、48、72、96和120 hpi时收集细胞和上清液。样品的效价通过Vero细胞上的菌斑试验测定。

**图3。**
Vero细胞中通过嵌合b/h PIV3表达RSV或hMPV蛋白。（A）感染b/h PIV3/RSV F1或F2或野生型RSV A2、b/h PIV 3（MOI为0.1）或48 hpi模拟感染细胞的Vero细胞裂解物的免疫印迹用RSV F特异性单克隆抗血清进行探测。与处理的RSV F相对应的～50-kDa频带₁在b/h PIV3/RSV F1和F2裂解液以及RSV A2中观察到蛋白质。～90 kDa的较大频带，未分离F₀前体也相对较少地存在于通道1和通道2中，这表明RSV F蛋白在嵌合病毒中有效地进行加工。（B）感染B/h PIV3/RSV G1或G2、RSV A2、B/h PIV 3（MOI为0.1）和模拟感染细胞裂解液的细胞裂解液在48 hpi时的Western blot。用RSV G多克隆抗血清进行Western blot检测，显示由b/h PIV3/RSV G1或G2或RSV A2表达的RSV G蛋白的成熟糖基化和未成熟形式。正如预期的那样，在感染b/h PIV3的Vero细胞或模拟感染细胞的裂解液中未观察到信号。（C） b/h PIV3/hMPV F1-或F2-、b/h PIV3-或模拟感染³⁵收集48 hpi的S标记细胞裂解物，并用hMPV特异性多克隆豚鼠抗血清进行免疫沉淀。在来源于b/h PIV3/hMPV F1和F2的细胞裂解液中观察到～80 kDa的条带，而b/h PIV 3-或模拟感染裂解液中不存在该条带。此大小与未合并的F一致₀hMPV蛋白。

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1. Collins，P.L.和B.R.Murphy。2002.呼吸道合胞病毒：反向遗传学和疫苗策略。病毒学296:204-211。-公共医学
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