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1992年11月;40(11):1741-9.
doi:10.1177/40.11.1431060。

戊二醛固定和乙醇处理后抗体完全穿透振动切片:神经肽的光学和电子显微镜

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戊二醛固定和乙醇处理后抗体完全穿透振动切片:神经肽的光学和电子显微镜

I J卢埃林-史密斯等。 组织化学与细胞化学杂志 1992年11月

摘要

为了开发一种对中枢神经系统神经组织进行定量电子显微镜免疫细胞化学的方法,我们测试了乙醇处理能在不损害超微结构的情况下提高免疫物质通过高浓度戊二醛固定的振动切片的渗透程度。用1%甲醛加1%或2.5%戊二醛灌注脊髓的横向或矢状振动节(60-80微米)在50%乙醇中洗涤0-70分钟,并染色以显示神经肽Y(NPY)的免疫反应性。使用半薄(1微米)或超薄切片评估背角NPY神经纤维染色的深度。在没有乙醇洗涤的情况下,免疫反应性神经纤维仅在横切面或矢状切面的表面5-10微米处可见。在横向振动切片中,垂直于切片切面的NPY神经纤维在50%乙醇中洗涤30分钟后完全染色。在振动切片的表面和中心,NPY免疫反应性静脉曲张和突触的数量是可比较的。在矢状切面中,NPY神经纤维平行于切面,即使在50%乙醇中70分钟后,也无法标记振动切面中心的纤维。乙醇暴露30分钟后,脊髓或延髓横切面的P物质和脑啡肽(Enk)免疫反应神经纤维也能完全染色。乙醇洗涤对超微结构没有明显的有害影响,尽管神经元中的细胞质基质数量随着暴露时间的增加而减少。这些结果表明,用50%乙醇洗涤至少30分钟,免疫反应物可以完全穿透用高浓度戊二醛固定的神经纤维,只要纤维在振动节的两面都有切口。这项技术使定量电子显微镜免疫细胞化学研究成为可能,并证明是确定中枢神经系统突触连接的有用工具。

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