Immunofluorescent detection of activation of initiator caspases-8 and -9 during pharmacologically induced apoptosis of cultured HeLa and endothelial cells

doi:10.1007/s00418-003-0536-1

.2003年6月；119(6):463-8.

doi:10.1007/s00418-003-0536-1。 Epub 2003年5月23日。

免疫荧光检测药物诱导培养HeLa和内皮细胞凋亡过程中启动子caspases-8和-9的激活

Suresh G Joshi先生¹, 桑吉夫·萨赫尼

附属公司

PMID： 12764618
内政部： 2007年10月10日/00418-003-0536-1

免疫荧光检测药物诱导培养HeLa和内皮细胞凋亡过程中启动子caspases-8和-9的激活

Suresh G Joshi先生等。组织化学细胞生物学. 2003年6月.

.2003年6月；119(6):463-8.

doi:10.1007/s00418-003-0536-1。 Epub 2003年5月23日。

作者

Suresh G Joshi先生¹, 桑吉夫·萨赫尼

附属

¹美国纽约州罗切斯特市埃尔姆伍德大道601号罗切斯特大学医学院内科血液/肿瘤科，邮编14642，邮政信箱610。

PMID： 12764618
内政部： 2007年10月10日/00418-003-0536-1

摘要

半胱氨酸蛋白酶是一组半胱氨酸激活的天冬氨酸导向蛋白酶，在程序性细胞死亡或凋亡的执行中起着不可或缺的作用。在细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶级联反应中，天然前酶类加工成下游效应半胱氨酸蛋白酶的激活形式取决于启动子半胱氨酸水解酶-8和-9的激活。我们描述了一种基于免疫荧光分析的染色程序，用于在药物诱导人脐静脉衍生内皮细胞原代培养物和已建立的HeLa细胞系中凋亡期间caspase-8和-9的激活。在staurosporine和etoposide诱导的细胞凋亡过程中，利用裂解位点定向抗体对caspase-8和-9的裂解片段进行特异性细胞内检测。随着治疗时间的延长，显示凋亡形态学征象的细胞数量、TUNEL分析显示DNA链断裂的证据以及活性形式caspase-8和caspase-9的阳性染色增加，提示启动子caspase的激活与凋亡的发生和进展相关。应用免疫细胞化学染色程序进行快速、特异的原位检测可以有效地帮助识别参与上游半胱天冬酶并阐明复杂的凋亡信号机制。

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