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.2003年2月;84(2-3):223-30.
doi:10.1016/s0960-0760(03)00032-3。

人胰岛素受体基因启动子中维生素D反应元件的鉴定

附属公司

人胰岛素受体基因启动子中维生素D反应元件的鉴定

贝戈尼亚大师等。 类固醇生物化学分子生物学杂志. 2003年2月.

摘要

本研究旨在探讨维生素D反应元件(VDRE)在人胰岛素受体(hIR)基因启动子中的可能存在和位置。为此,将hIR启动子(野生型启动子)的-1819至-271 bp片段和该启动子的进行性5'缺失(高达-1473和-876 bp)连接到荧光素酶pGL2-basic载体上,分别构建报告的质粒:phIR(-1819)-GL2、phIR(-1473)-GL2-和phIR(-876)-GL2。用这些质粒瞬时转染U-937细胞,然后对细胞进行处理或用10(-8)M 1,25-二羟维生素D(3)(1,25D-3)处理24小时。荧光素酶测定结果显示,虽然激素使野生启动子的活性增加了1.6倍,但该启动子进行性5'缺失的活性分别增加了1.7倍和1.6倍。因此,hIR启动子从-876 bp延伸到-271 bp的区域似乎包含VDRE,并且足以被1,25D(3)诱导。为了识别这些潜在的VDRE,我们通过与一致的VDRE序列同源性对候选序列进行了计算机搜索。该搜索产生了一个位于-761和-732 bp之间的序列(5'CGTCGGGCCTGTGGGGCCCCGTCCGGGGTC3'),其中包括一个重叠的AP-2样序列,是一个很好的候选序列。电泳迁移率变化分析表明,维生素D受体(VDR)特异性识别该序列,因为VDR-DNA复合物能够与未标记探针竞争,并被特异性抗VDR抗体9A7清除。这些数据代表了hIR基因启动子中VDRE的首次鉴定。

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