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.2003年5月1日;116(第9部分):1775-1786。
doi:10.1242/jcs.00388。

基于Dlk/Pref-1表达的成肝细胞分离

附属公司

基于Dlk/Pref-1表达的成肝细胞分离

藤井直树等。 细胞科学杂志. .

摘要

成肝细胞是肝细胞和胆道上皮细胞的常见祖细胞,尽管其性质基本上仍不清楚。为了分离和鉴定成肝细胞,我们用信号序列陷阱法寻找小鼠胎肝细胞中表达的细胞表面抗原,发现Dlk,也称为Pref-1,在胎肝中强烈表达。免疫组织化学和northern分析表明,Dlk在E10.5肝芽中高度表达。这种强表达一直持续到E16.5期,此后显著下调。我们使用抗Dlk的单克隆抗体,通过荧光激活细胞分选机或自动磁性细胞分选机分离Dlk+细胞。从胎肝分离的Dlk+细胞表达白蛋白,并在与HGF和EGF低密度培养5天后形成集落。来自E14.5 Dlk+细胞的菌落中有60%以上同时含有白蛋白+和细胞角蛋白19+细胞,这表明大多数集落形成的Dlk+细胞能够分化为肝细胞和胆道上皮细胞系。此外,在大多数培养细胞中,电镜观察到大量微绒毛,也表明在此条件下Dlk+细胞发生分化。此外,7%的集落形成的Dlk+细胞不仅具有双能性,而且具有高度增殖性,在培养5天内形成一个包含100多个细胞的大集落。通过将Dlk+细胞移植到脾脏中,在受体肝脏中发现供体衍生的肝细胞,表明Dlk~+细胞在体内分化为肝细胞。这些结果表明,Dlk+细胞是成肝细胞,并且Dlk是一个有用的标记物,可以从胎儿肝脏中富集高度增殖的成肝细胞。

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