siRNAs can function as miRNAs

doi:10.1101/gad.1064703

.2003年2月15日；17(4):438-42.

doi:10.1101/gad.1064703。

siRNAs可以作为miRNAs发挥作用

约翰·多恩奇¹, 克里斯蒂安·彼得森, 菲利普·A·夏普

附属机构

PMID： 12600936
预防性维修识别码：项目经理195999
DOI（操作界面）： 10.1101/gad.1064703

siRNAs可以作为miRNAs发挥作用

约翰·邓奇等人。基因开发. 2003.

.2003年2月15日；17(4):438-42.

doi:10.1101/gad.1064703。

作者

约翰·多恩奇¹, 克里斯蒂安·彼得森, 菲利普·A·夏普

附属

¹美国马萨诸塞州剑桥市麻省理工学院生物系癌症研究中心，邮编02139。

PMID： 12600936
预防性维修识别码：项目经理195999
DOI（操作界面）： 10.1101/gad.1064703

摘要

随着RNA干扰（RNAi）和相关现象的发现，RNA继续发挥新的调节作用。这里我们表明，在哺乳动物组织培养中，短干扰RNA（siRNA）可以抑制靶mRNA的表达，其3'UTR中具有部分互补结合位点，很像内源性编码的microRNAs（miRNAs）的功能。这种抑制的机制是协同的，不同于siRNAs对mRNA切割的催化机制。利用siRNAs研究翻译抑制有望解析miRNAs的序列和结构决定因素以及基因抑制的一般机制。

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数字

图1
siRNAs翻译性抑制靶mRNA(A类)构建到靶mRNA 3′UTR的结合位点与CXCR4 siRNA反义链之间的拟议相互作用示意图。siRNA 3′端的胸腺嘧啶是脱氧核苷酸。(B类)转染HeLa细胞的双重荧光素酶分析。三个*动物海肾*荧光素酶(卢比-本试验中使用了luc）构建物。其中一个未经修饰（“无位点”），另一个含有与siRNA链完全互补的结合位点，如A类（“1个完全”），其中一个包含四个如A类串联重复（“4个凸起”）。A类*萤火虫*荧光素酶(*Pp（磅/平方英寸）*-luc）作为内部转染对照。不使用siRNA（黑色条）、非特异性（靶向GFP）siRNA（白色条）或CXCR4 siRNA（灰色条）转染细胞。比率卢比-luc到*Pp（磅/平方英寸）*-luc表达归一化为无siRNA转染，±S。E.来自三个独立的实验。(C类)RT-PCR获取的RNA。从转染了中所述结构的细胞中获取总RNAB类对照实验表明，DNA已成功从RNA制剂中去除，PCR处于线性扩增范围内（数据未显示）。(D类)CXCR4 siRNA的感觉链和设计的结合位点之间拟议的相互作用示意图。(E类)RNA分析*Pp（磅/平方英寸）*-具有四个隆起CXCR4结合位点的luc（如所示A类)靶向翻译抑制，转染CXCR4 siRNA（+）或无siRNA（−）。通过Northern分析检测到RNA，探测第页-luc或β-actin。

图2
siRNA序列和结构规则分析：mRNA相互作用。HeLa细胞被转染含有四个串联重复序列结合位点的构建物，这些结构物与任一反义序列都不完全互补(A类)或感觉(B类)GFP siRNA链。对荧光素酶表达的影响由白色条±S表示。E.来自两个独立实验，标准化为无siRNA转染的细胞（黑条）。然后使用不同的siRNA产生不同的突起，用灰色箭头表示。对这些新的相互作用进行了分析，并用灰色条表示。

图3
RNAi和翻译抑制的比较。(A类)滴定*动物海肾*荧光素酶(卢比-luc）包含零（○）、二的构造(▪), 四（×）或六（●）个隆起结合位点，用于与CXCR4 siRNA的反义链配对，如图1A所示。绘制所达到的抑制水平，并将其归一化为无siRNA转染的细胞(B类)滴定*Pp（磅/平方英寸）*-包含零（○）、一的luc构造(▪), 两个或三个结合位点与CXCR4 siRNA的反义链完全互补（图1A）。(C类)每个站点的相对抑制分析有助于A类，归一化为具有两个结合位点的结构，±S。E(D类)每个站点的相对抑制分析有助于B类，归一化为具有一个结合位点的结构，±S。E。

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