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2003年2月;7(2):228-36.
doi:10.1016/s1525-0016(02)00037-0。

使用发夹siRNA表达载体同时抑制GSK3alpha和GSK3beta

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使用发夹siRNA表达载体同时抑制GSK3alpha和GSK3beta

Jenn-Yah Yu女士等。 分子治疗 2003年2月
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摘要

短干扰RNA(siRNAs)可以介导序列特异性抑制哺乳动物细胞基因表达。我们和其他人最近开发了基于表达载体的系统,用于在哺乳动物细胞中合成siRNA或发夹siRNA。基于表达载体的RNA干扰(RNAi)可有效抑制靶基因的表达,可能成为分析基因功能的有力工具。在这里,我们比较了表达发夹状siRNA设计的载体对连接两条siRNA链的不同环序列或不同长度的双链区域的抑制作用。我们的结果表明,延长相对无效的发夹siRNA的19-核苷酸双链区可以增加抑制,但增加有效的19-nt发夹siRNA的长度不会增加抑制。我们还证明发夹状siRNA载体可以同时抑制两个靶基因。我们以糖原合成酶激酶-3alpha(GSK-3alpha)和GSK-3beta为靶点,这两种相关激酶参与多种细胞过程的调节,也参与多种人类疾病的发病机制。通过发夹siRNA载体转染抑制GSK-3alpha或GSK-3beta可导致GSK-3靶点β-catenin的表达升高,而抑制这两种激酶可进一步增加β-catentin的表达。我们的结果表明,基于载体的siRNA抑制可能有助于剖析GSK-3alpha和GSK-3beta在体细胞中的功能作用。利用发夹状siRNA表达载体同时抑制两个或多个基因的能力将有助于研究哺乳动物细胞中的基因功能。

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