IL-8 expression and its possible relationship with estrogen-receptor-negative status of breast cancer cells

doi:10.1038/sj.onc.1206113

.2003年1月16日；22(2):256-65.

doi:10.1038/sj.onc.1206113。

IL-8的表达及其与乳腺癌细胞雌激素受体阴性状态的关系

阿丽亚娜·弗伦德¹, 科林·乔沃, 让-保罗·布鲁利特, 安妮克·卢卡斯, 马蒂厄·拉克鲁瓦, 安妮·利茨纳, 弗朗索瓦斯·维格农, Gwendal Lazennec公司

附属公司

PMID： 12527894
PMCID公司：项目编号：C2034407
内政部： 10.1038/sj.onc.1206113

IL-8的表达及其与乳腺癌细胞雌激素受体阴性状态的关系

阿丽亚娜·弗伦德等。癌基因. 2003.

.2003年1月16日；22(2):256-65.

doi:10.1038/sj.onc.1206113。

作者

阿丽亚娜·弗伦德¹, 科林·乔沃, Jean-Paul布鲁莱特, 安妮克·卢卡斯, 马蒂厄·拉克鲁瓦, 安妮·利茨纳, 弗朗索瓦斯·维根, Gwendal Lazennec公司

附属

¹INSERM U540，癌症分子和细胞内分泌，法国蒙彼利埃。

PMID： 12527894
PMCID公司：项目编号：C2034407
内政部： 10.1038/sj.onc.1206113

摘要

雌激素受体（ER）状态是乳腺癌治疗中的一个重要参数，因为ER阳性乳腺癌的预后比ER阴性肿瘤好。这种差异主要来自ER阳性肿瘤较低的侵袭性和侵袭性。在此，我们证明，白细胞介素-8（IL-8）在大多数ER阴性乳腺、卵巢细胞系和乳腺肿瘤样本中明显过度表达，而在ER阳性乳腺或卵巢细胞系中未检测到明显的IL-8水平。我们还从ER阴性的MDA-MB-231细胞中克隆了人IL-8，并且我们表明乳腺癌细胞产生的IL-8与单核细胞衍生的IL-8。有趣的是，ER阴性乳腺癌细胞的侵袭潜能至少部分与IL-8的表达有关，但与IL-8-受体水平无关。此外，IL-8将ER阳性乳腺癌细胞的侵袭力提高了两倍，从而证实了IL-8的抗侵袭作用。另一方面，雌激素受体在ER阴性细胞中的外源性表达导致IL-8水平下降。总之，我们的数据表明，IL-8的表达与乳腺癌和卵巢癌细胞的ER状态呈负相关。我们还支持IL-8的表达与体外肿瘤细胞更高的侵袭潜能相关的观点，这表明IL-8可能是肿瘤侵袭性的新标志物。

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数字

图1
IL-8在MDA-MB-231细胞中高度表达。A.用乙醇载体或E2（10）处理MDA-MB-231或MCF-7细胞⁻⁹M）持续4、12或48小时。RNA用于使用IL-8探针的northern分析。用western blot分析经乙醇载体或E2（10）处理的MDA-MB-231和MCF-7细胞中IL-8蛋白的含量⁻⁹M）持续48小时。C.通过MDA-MB-231总RNA与IL-8特异性引物的逆转录反应扩增IL-8 cDNA。PCR产物的大小约为900 bp，而1kb标记物（外源性）（M）的大小为900 bp。D.克隆后，对PCR产物进行测序。该序列与已知的IL-8序列100%同源。

图2
IL-8 RNA在乳腺癌细胞中有差异表达。培养ER阴性（上面板）或ER阳性（下面板）乳腺癌细胞，并用雌二醇处理或不处理（E2:10⁻⁹M）持续48小时。提取后，使用20μg来自不同细胞的总RNA进行Northern印迹，并与IL-8或pS2探针杂交。用RNA 28S探针检查等负荷。这里显示了一个典型实验的数据。

图3
IL-8优先由ER阴性癌细胞分泌。A.ER阴性乳腺癌细胞。B.ER阳性乳腺癌细胞。C.ER阴性宫颈癌（Hela）或卵巢细胞（PEO14）或ER阳性卵巢癌细胞（BG1、PEO4）。细胞接种在培养基中的六孔板中。生长48小时后，从每个孔中收集1.5ml培养基，通过ELISA评估IL-8水平。结果表示为ng IL-8/ml/48h/百万细胞，代表三个独立实验的平均值±SD。在MOI 100时，用Ad5、Ad-hERα或Ad-hERβ腺病毒感染D.Hela细胞（见材料和方法）。表达48小时后，收集培养基并用Elisa分析IL-8含量。结果表示为ng IL-8/ml/48h/百万细胞，代表三个独立实验的平均值±SD。用ERE2-TK-LUC报告子瞬时转染法测定不同细胞系的雌激素反应性。细胞在对照载体乙醇或10的存在下生长24小时⁻⁹M E2号。结果显示，在β-半乳糖苷酶活性归一化后，E2存在时报告基因活性的诱导倍数与无配体（n=3）时的活性相比。如材料和方法部分所述，通过半定量PCR测定不同细胞系中F.ERβ的表达。将ERβ表达标准化为rS9水平后，结果以任意单位表示，并表示两个实验的平均值。

图3
IL-8优先由ER阴性的癌细胞分泌。A.ER阴性乳腺癌细胞。B.ER阳性乳腺癌细胞。C.ER阴性宫颈癌（Hela）或卵巢细胞（PEO14）或ER阳性卵巢癌细胞（BG1、PEO4）。细胞接种在培养基中的六孔板中。生长48小时后，从每个孔收集1.5 ml培养基，通过ELISA评估IL-8水平。结果表示为ng IL-8/ml/48h/百万细胞，代表三个独立实验的平均值±SD。在MOI 100时，用Ad5、Ad-hERα或Ad-hERβ腺病毒感染D.Hela细胞（见材料和方法）。表达48小时后，收集培养基并用Elisa分析IL-8含量。结果表示为ng IL-8/ml/48h/百万细胞，代表三个独立实验的平均值±SD。用ERE2-TK-LUC报告子瞬时转染法测定不同细胞系的雌激素反应性。细胞在对照载体乙醇或10的存在下生长24小时⁻⁹M E2号。结果显示，在β-半乳糖苷酶活性归一化后，E2存在时报告基因活性的诱导倍数与无配体（n=3）时的活性相比。如材料和方法部分所述，通过半定量PCR测定不同细胞系中F.ERβ的表达。将ERβ表达归一化为rS9水平后，结果以任意单位表示，并表示两个实验的平均值。

图4
IL-8在ER阴性乳腺肿瘤中优先表达。A.采用RT-PCR分析14例患者的ER阴性（左侧）或阳性（右侧）乳腺肿瘤的ERα、ERβ和IL-8表达。rS9被用作样品间等扩增的控制。除ERβ（35个周期）外，所有标记物均进行了29个周期。用ELISA法对每个肿瘤样本中的雌激素受体（ER）和孕酮受体（PR）进行定量。结果以fmol/mg蛋白质表示。C.样本中IL-8水平的表示。IL-8水平已归一化为rS9水平，结果以任意单位表示。

图5
癌细胞的侵袭潜能。细胞被镀在横孔或控制板上。迁移24h后，迁移细胞的百分比表示为三个独立实验的平均值±SD。A.ER阴性乳腺癌细胞。B.ER阳性乳腺癌细胞。C.如图3所示，ER阴性宫颈癌或卵巢细胞或ER阳性卵巢癌细胞。

图6
IL-8的表达与IL-8受体水平无关，并且促进侵袭但不促进增殖。A.使用CXCR2特异性引物通过RT-PCR监测CXCR2的表达。这里显示了一个具有代表性的实验。使用rS9引物进行PCR，以检查相同的反转录和扩增。B.左侧面板。用IL-8 cDNA的正义（IL-8）或反义（IL-8AS）版本转染ZR-75-1细胞。转染24h后，将细胞置于transwell或对照板上。侵袭开始后24h，用荧光素酶法检测迁移细胞。对照迁移细胞的百分比设置为100。结果表示为对照迁移细胞的百分比，并表示三个实验的平均值±SD。右侧面板。同样的实验，但将重组IL-8（0.15μg/ml）添加到培养基中。C.反义IL-8对ER阴性MDA-MB-231细胞侵袭的影响。D.IL-8不修饰*在体外*乳腺癌细胞增殖。用载体或IL-8（0.05μg/ml或0.15μg/ml）治疗第2、4和6天，测定ZR-75-1和MDA-MB-231细胞的增殖率。结果代表四次测定的平均值（SD<15%）。

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