跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2003年1月；77(1):237-44.
doi:10.128/jvi.77.1.237-244.2003。

表达人类免疫缺陷病毒1型gag的第二代狂犬病病毒疫苗载体大大降低了致病性，但具有高度免疫原性

詹姆斯·麦盖蒂根 1, 罗杰·波梅兰茨, 凯瑟琳·A·西勒, 菲利普·麦肯纳, 希瑟·D·福利, B迪茨施罗德, 马蒂亚斯·施奈尔
附属公司

表达人类免疫缺陷病毒1型gag的第二代狂犬病病毒疫苗载体大大降低了致病性，但具有高度免疫原性

詹姆斯·麦盖蒂根等。 J维罗尔. 2003年1月.

摘要

狂犬病病毒（RV）疫苗株基载体作为其他病毒性疾病如人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）感染和丙型肝炎的疫苗显示出巨大的前景，但其低残留致病性仍然是使用中的一个问题。在这里，我们描述了几种表达HIV-1 Gag的高度减毒的第二代RV疫苗载体。对于这种方法，我们通过将RV糖蛋白（G）中333位（R333）的精氨酸替换为谷氨酸（E333），删除RV G细胞质域（CD）的43个氨基酸，或结合R333交换和CD缺失来修改先前描述的RV疫苗载体SPBN。此外，我们构建了一种新的RV载体，从RV磷酸蛋白基因（BNSP-Gag）上游的RV转录单元而不是G基因上游表达HIV-1 Gag。正如SPBN-Gag的预期和证明，所有疫苗载体在外周给药后均无致病性。然而，含有RV G修饰的新的第二代疫苗载体在颅内感染10（5）种感染颗粒后也无致病性，BNSP-Gag使小鼠死亡率降低50%。值得注意的是，观察到的致病性减弱并没有导致针对RV G的体液反应减弱，也没有导致之前观察到的针对HIV-1 Gag的强大细胞反应减弱。这些发现表明，可以构建非常安全和高效的裂谷热疫苗，并进一步强调了其作为有效抗病毒疫苗的潜在效用。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
表达HIV-1 Gag的不同重组疫苗载体的构建。顶部是两个基于RV疫苗株的载体，其中包含一个额外的转录停止启动信号，两侧是G和L基因（SPBN）或N和P基因（BNSP）之间的两个独特限制位点。这些载体是导入编码HIV-1 Gag的基因（SPBN-Gag、SPBN-333-Gag，SPBN-ΔCD-Gag和SPBN-333ΔCD-Gag）的靶点。通过定点突变和PCR策略，RV G中333位的氨基酸从精氨酸（R）转变为谷氨酸（E）（SPBN-333-Gag和SPBN-333-ΔCD-Gag）和/或删除RV G CD（黑盒）中44 aa中的43个（SPBN-ΔCD-Gag及SPBN-333.ΔCD-Cag）。
图2。
图2。
重组疫苗载体的Western blot分析。BSR细胞感染SPBN、SPBN-Gag、SPBF-333-Gag，SPBN-ΔCD-Gag和SPBN-333-ΔCD-Gag或BNSP-Gag（MOI为2），48小时后裂解。用SDS-PAGE分离蛋白质，并用RV RNP（A）、RV G（B）或HIV-1 p24（C）特异性抗体进行Western blotting。在所有重组RV（A）中检测到预期大小的RV N蛋白，而RV G特异性抗体检测到SPBN、SPBN-Gag、SPBF-333-Gag，BNSP和BNSP-Gag的62-kDa蛋白，以及SPBN-ΔCD-Gag-和SPBN-333-ΔCD-Gag感染细胞（B）的细胞提取物中稍快的迁移蛋白。用HIV-1 Gag特异性抗体确认了SPBN-Gag、SPBN-333-Gag，SPBN-ΔCD-Gag和BNSP-Gag中HIV-1 p55的表达。
图3。
图3。
重组疫苗载体的多周期复制和一步生长曲线。BSR细胞以0.01（多周期生长；a）或5（一步生长曲线；B）的MOI感染SPBN、SPBN-Gag、SPBF-333-Gag，SPBN-ΔCD-Gag和SPBN-333-ΔCD-R-5、BNSP或BNSP-Gag。收集等分的组织培养上清液，并重复测定病毒滴度。
图4。
图4。
新的基于RV的疫苗载体即使在小鼠体内进行腹腔注射后也是安全的。用105SPBN、SPBN-Gag、SPBF-333-Gag，SPBN-ΔCD-Gag和SPBN-333-ΔCD-Gag的感染性颗粒，BNSP或BNSP-Gag。观察小鼠4周，记录平均体重（A）和死亡率（B）。误差线（A），标准偏差。
图5：。
图5：。
存活的小鼠对RV G产生强烈的免疫反应。存活的小鼠在静脉注射后28天进行放血，并分析各组汇集的血清在系列稀释液中的抗RV G ELISA反应性。外径，光密度。
图6。
图6。
重组疫苗载体在免疫小鼠中诱导类似的体液和细胞免疫反应。（A） RV G ELISA。五组BALB/c小鼠接种SPBN、SPBN-Gag、SPBF-333-Gag，SPBN-ΔCD-Gag和SPBN-333-ΔCD-Gag。使用来自每个免疫组的混合血清的系列稀释液，通过ELISA测定抗RV G的抗体滴度。上的1到9x个轴表示从1:100到1:25600的两倍稀释度。（B） ELISPOT分析。用SPBN、SPBN-Gag、SPBN-333-Gag、SPBN-ΔCD-Gag、SPBN-333-ΔCD-Gag、BNSP和BNSP-Gag免疫两组BALB/c小鼠，并在免疫后4至5周用表达HIV-1Gag的重组痘苗病毒攻击。对两个小鼠的脾细胞池进行不同稀释度的IFN-γ分泌细胞分析。误差线，三个独立实验的标准偏差。表达HIV-1 Gag（VSV-Gag）的重组VSV被纳入最后一轮实验（无误差条）。外径，光密度。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Adachi，A.、H.E.Gendelman、S.Koenig、T.Folks、R.Willey、A.Rabson和M.A.Martin。在感染性分子克隆转染的人类和非人类细胞中产生获得性免疫缺陷综合征相关逆转录病毒。J.维罗尔。59:284-291.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Ball，L.A.、C.R.Pringle、B.Flanagan、V.P.Perepelitsa和G.W.Wertz。重新排列水疱性口炎病毒的P、M和G基因的表型后果。J.维罗尔。73:4705-4712.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Buchholz，U.J.、S.Finke和K.K.Conzelmann。1999.从cDNA中生成牛呼吸道合胞病毒（BRSV）：BRSV NS2对组织培养中的病毒复制不是必需的，人类RSV先导区充当BRSV基因组的功能启动子。J.维罗尔。73:251-259.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Conzelmann、K.K.、J.H.Cox、L.G.Schneider和H.J.Thiel。1990年。减毒狂犬病病毒SAD B19的分子克隆和完整核苷酸序列。病毒学175:485-499。-公共医学
    1. Coulon，P.、J.P.Ternaux、A.Flamand和C.Tuffereau。1998年，狂犬病病毒的无毒突变株不能在体内和体外感染运动神经元。J.维罗尔。72分273秒278秒。-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型