Production of maternal-zygotic mutant zebrafish by germ-line replacement

doi:10.1073/pnas.222459999

.2002年11月12日；99(23):14919-24.

doi:10.1073/pnas.222459999。 Epub 2002年10月23日。

用生殖系替换法生产母体合子突变斑马鱼

布莱恩·西鲁纳¹, 吉尔伯特·魏丁格, 霍尔格·科诺特, 伯纳德·蒂斯, 克里斯汀·蒂斯, 埃雷兹·拉兹, 亚历山大·席尔

附属公司

PMID： 12397179
预防性维修识别码： PMC137520型
内政部： 10.1073/pnas.222459999

用生殖系替换法生产母体合子突变斑马鱼

布莱恩·西鲁纳等。美国国家科学院程序. 2002.

.2002年11月12日；99(23):14919-24.

doi:10.1073/pnas.222459999。 Epub 2002年10月23日。

作者

布莱恩·西鲁纳¹, 吉尔伯特·魏丁格, 霍尔格·科诺特, 伯纳德·蒂斯, 克里斯汀·蒂斯, 埃雷兹·拉兹, 亚历山大·席尔

附属

¹美国纽约大学医学院细胞生物学系，斯基尔贝尔生物分子医学研究所发育遗传学项目，邮编：10016。

PMID： 12397179
预防性维修识别码： PMC137520型
内政部： 10.1073/pnas.222459999

摘要

我们报道了一种通过斑马鱼生殖系转移合子致死突变的普遍适用策略。通过使用阻断原始生殖细胞（PGC）发育的吗啉寡核苷酸，我们生成了缺乏内源性PGC的胚胎，作为来自纯合子突变供体的生殖细胞移植的宿主。通过将特异标记的供体PGC定位到嵌合体胚胎中发育中的性腺区域，可以确定移植是否成功。通过为相隔英里的基因座产生母体和母体合子突变体，验证了这一策略，其结果是用供体PGC完全替代宿主生殖系。这种生殖系替换技术为研究合子致命突变的母体效应提供了一个强有力的工具。此外，产生大量纯突变胚胎的能力将极大地促进胚胎学、遗传学、基因组学和生物化学研究。

PubMed免责声明

数字

**图1。**
使用*GFP-编号1-3′UTR*标记技术。(A类)细胞移植策略概述*GFP-编号1-3′UTR*-标记的突变供体胚胎进入αPGC-MO注射的WT宿主的边缘。在本例中，“m”指任何合子突变密耳^电话273. (B类)在30 hpf时，来自注入控制的PGC密耳_九胚胎被专门标记为GFP（箭头）。(C类)在30 hpf条件下对宿主胚胎进行筛选，以确定是否存在GFP标记的供体PGC，以及它们是否正常迁移到卵黄延伸前部的性腺中胚层（箭头所示）。

**图2。**
使用罗丹明-外显子标记技术的种系替换策略。(A类)移植策略概述，显示了将细胞从罗丹明-dextran标记的突变供体胚胎边缘转移到αPGC-MO注射WT宿主的动物极。(B类)在30 hpf时，对照供体胚胎内的所有细胞都被有效地标记为罗丹明提取物。(C类)30 hpf的嵌合宿主胚胎显示罗丹明-外显子标记的供体细胞对前神经外胚层谱系的体细胞贡献（*）。对宿主胚胎进行筛选，以确定是否存在已成功迁移至性腺中胚层的标记供体PGC（箭头所示）。

**图3。**
PCR基因分型密耳-突变体和WT胚胎。所示为3%的琼脂糖凝胶分辨率*幽门螺杆菌*Ch4V和*Aci公司*从制备的基因组DNA扩增的PCR片段的消化产物密耳^电话273/密耳^电话273,密耳^电话273/+和+/+胚胎。

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