Potentiation of serum response factor activity by a family of myocardin-related transcription factors

doi:10.1073/pnas.222561499

.2002年11月12日；99(23):14855-60.

doi:10.1073/pnas.222561499。 Epub 2002年10月23日。

心肌相关转录因子家族对血清反应因子活性的增强作用

王大志¹, 李世杰, 德克·霍克梅耶, 莉莲·萨瑟兰, 王志高, 格哈德·施拉特, 詹姆斯·理查德森, 阿尔弗雷德·诺德海姆, 埃里克·N·奥尔森

附属公司

PMID： 12397177
预防性维修识别码：项目编号137508
内政部： 10.1073/pnas.222561499

心肌相关转录因子家族对血清反应因子活性的增强作用

王大志等。美国国家科学院程序. 2002.

.2002年11月12日；99(23):14855-60.

doi:10.1073/pnas.222561499。 Epub 2002年10月23日。

作者

王大志¹, 李世杰, 德克·霍克梅耶, 莉莲·萨瑟兰, 王志高, 格哈德·施拉特, 詹姆斯·理查德森, 阿尔弗雷德·诺德海姆, 埃里克·N·奥尔森

附属

¹德克萨斯大学西南医学中心分子生物学系，美国达拉斯哈里·海恩斯大道6000号，邮编75390-9148。

PMID： 12397177
预防性维修识别码：项目编号137508
内政部： 10.1073/pnas.222561499

摘要

Myocardin是一种SAP（SAF-a/B，Acinus，PIAS）域转录因子，与血清反应因子（SRF）相关，能有效增强SRF-依赖性转录。在这里，我们描述了两种心肌相关转录因子（MRTF），A和B，它们也与SRF相互作用并刺激其转录活性。虽然心肌蛋白在心脏和平滑肌细胞中特异表达，但MRTF-A和-B在许多胚胎和成人组织中表达。在SRF缺乏的胚胎干细胞中，心肌蛋白和MRTF无法激活依赖SRF的报告基因，从而证实了它们对SRF的依赖性。Myocardin和MRTFs包含一个以前没有特征化的SRF辅因子家族，具有在广泛组织中调节SRF靶基因的潜力。

PubMed免责声明

数字

**图1。**
肌球蛋白家族转录因子的结构。(A类)心肌蛋白、MRTF-A和MRTF-B蛋白的示意图。++，基础区域；NTD，N端结构域；Q、富含谷氨酰胺的区域。右侧显示了每个蛋白质中的氨基酸数量，以及每个MRTF和心肌蛋白的指示结构域之间的百分比一致性。(B类)心肌蛋白和MRTF之间的氨基酸序列同源性。彩色条对应于中所示的保守区域A类. (C类)小鼠的基因组织*心肌素*,*MRTF公司*-A类、和*MRTF公司*-B类外显子的颜色对应于A类虚线表示另一个外显子。基因结构上方显示了基因组DNA的千叶。显示了翻译起始密码子（ATG）和终止密码子（TAA和TGA）。

**图2。**
心肌蛋白和MRTFs在成人和胚胎组织中的表达模式。(A类和B类)成年小鼠组织中MRTF-A和-B的Northern blot分析。(C类)心肌蛋白的表达(一–*e（电子）*)、MRTF-A(*（f）*–j个)和MRTF-B(k个–*o（o）*)在小鼠胚胎中检测到就地杂交。肌球蛋白在E13.5胚胎的心脏和平滑肌细胞中表达(一). 同一胚胎的高倍放大显示心肌蛋白在心脏、食管平滑肌和背主动脉中的表达(b条)，肺(*c（c）*)、膀胱和小肠(d日)和胃(*e（电子）*)如图所示。MRTF-A在舌中表达(*（f）*和克)、肺和隔膜(小时)，肾脏(我)，膀胱(j个)和E13.5的冒号(*（f）*)和E15.5(克–j个)小鼠胚胎。MRTF-B在E13.5中的表达(k个)和E15.5(我–*o（o）*)小鼠胚胎。注意肺部有较高水平的表达(米)，肾脏(n个)和嗅上皮(*o（o）*). 箭头输入小时和米指向肺部我和n个到肾脏。

**图3。**
MRTFs的转录活性。完整的ORF(A类)或TAD(B类)将心肌蛋白和MRTF融合到GAL4 DNA结合域，并使用GAL4依赖荧光素酶报告子（UAS-luc）在转染COS细胞中检测转录活性。(C类)荧光素酶报告子的反激活与*SM22型*或*ANF公司*启动子或CArG-的四个串联副本*SM22型*如图所示，肌钙蛋白和MRTF的启动子。WT是指野生型启动子，Mut是指两个CArG盒中发生突变的启动子。值表示为高于矢量表达背景水平的表达折叠激活。所有转染分析至少进行了三次，并显示了代表性数据。

**图4。**
心肌蛋白和MRTFs转录活性缺乏*Srf公司*（−/−）ES细胞。野生型(A类)和*Srf公司*(−/−) (B类)将SM22-荧光素酶和（mSm）瞬时转染ES细胞₂-荧光素酶报告子和编码肌球蛋白、MRTF和SRF的表达质粒，如*材料和方法*. (A类)缺少N末端域（NTD）的Myocardin被用于私有交易（mSm）₂-萤光素酶。值表示为高于矢量表达背景水平的表达折叠激活。所有转染分析至少进行了三次，并显示了代表性数据。

**图5。**
SRF和MRTF的相互作用。(A类)凝胶流动性变化分析采用³²P标记的寡核苷酸探针*SM22型*CArG-far和*在体外*在有无SRF的情况下，肌钙蛋白、MRTF-A或MRTF-B的翻译产物。星号表示SRF与肌钙蛋白或MRTF-A之间形成的三元复合物的位置。(B类)GST-SRF蛋白相互作用。Myocardin，MRTF-A和-B，翻译*在体外*带有[³⁵S] 如图所示，蛋氨酸与GST-SRF-琼脂糖珠或GST-琼脂酶珠孵育。洗涤后，在10%SDS/PAGE上分离与珠子相关的蛋白质，并通过放射自显影术进行分析。的十分之一*在体外*-翻译后的蛋白质也直接在凝胶上分离，作为负载控制。

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1. Reecy J.、Belaguli，N.和Schwartz，R.（1998），《心脏发育》，Harvey，R.和Rosenthal，N.编辑（圣地亚哥学术出版社），第273-290页。
1. Chang P.S.，Li，L.，McAnally，J.&Olson，E.N.（2001）《生物杂志》。化学。276, 17206-17212.-公共医学
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