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.2002年11月29日;277(48):46552-8.
doi:10.1074/jbc。M208596200。 Epub 2002年9月24日。

在人类家政(GLUD1)的调节域用Ser替代Arg-443谷氨酸脱氢酶几乎消除了基础活性,并显著改变了ADP和L-亮氨酸对酶的激活

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在人类家政(GLUD1)的调节域用Ser替代Arg-443谷氨酸脱氢酶几乎消除了基础活性,并显著改变了ADP和L-亮氨酸对酶的激活

Ioannis Zaganas公司等。 生物化学杂志. .
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摘要

人谷氨酸脱氢酶(GDH)存在于GLUD1(家政)和GLUD2特定(脑特异)亚型中,它们在基础活性和变构调节方面存在显著差异。为了确定这些功能差异的结构基础,我们在四个不同于GLUD2同工酶的残基处对GLUD1 GDH进行了突变。功能分析表明,Ser替代Arg-443(但不是Thr替代Ser-331,Leu替代Met-370,Leu代替Met-415)实际上消除了基础活性,并在没有其他效应物的情况下完全消除了l-亮氨酸(1-10mm)对酶的激活。然而,当反应混合物中存在ADP(0.025-0.1 mm)时,l-亮氨酸(0.3-6.0 mm)激活突变酶的活性高达>2000%。R443S突变体对ADP的敏感性(SC(50)=383.9+/-14.6 micro)远低于GLUD1 GDH(SC(50=31.7+/-4.2 micro);p<0.001);然而,在1 mm ADP下,突变体的V(max)(136.67μmol min(-1)mg(-1))与GLUD1 GDH的V(max)(152.95μmol in(-1)mg/1)相当。改变反应缓冲液的组成和pH值会对突变型和野生型GDH产生不同的影响。Arg-443位于“天线”结构中,在催化过程中发生主要构象变化的螺旋中,参与亚单位间的通讯。它被Ser替代足以损害人类GDH的催化和变构功能。

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