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.2002年11月22日;277(47):45129-40.
doi:10.1074/jbc。M205165200。 Epub 2002年9月6日。

NF-kappa B介导的炎症反应程序需要IKKalpha、IKKbeta和NEMO/IKKgamma

附属公司

NF-kappa B介导的炎症反应程序需要IKKalpha、IKKbeta和NEMO/IKKgamma

向丽等。 生物化学杂志. .

摘要

已知NF-kappaB激活信号体复合体的IKKbeta和NEMO/IKKgamma亚单位对于通过炎症和其他应激刺激激活NF-kapbaB至关重要。然而,IKKalpha亚单位被认为对后一种反应是不必要的,而是作为其他新型NF-kappaB依赖和独立功能的体内介体发挥作用。与这种普遍接受的IKKalpha生理功能观点相反,我们在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中证明,与IKKbeta和NEMO/IKKgamma类似,IKKalpha也是肿瘤坏死因子α和IL-1反应性IKK信号体依赖性靶基因的全球调节器,包括许多已知的NF-kappaB靶基因,如血清淀粉样蛋白A3、C3、白细胞介素(IL)-6、IL-11、IL-1受体拮抗剂、血管内皮生长因子、Ptx3、β(2)-微球蛋白、IL-1α、Mcp-1和-3,RANTES(调节活化正常T细胞表达和分泌)、Fas抗原、Jun-B、c-Fos、巨噬细胞集落刺激因子和粒细胞巨噬细胞集落激励因子。只有少数NF-kappaB依赖性靶基因优先依赖于IKKalpha或IKKbeta。野生型MEF中反显性IkappaBalpha超阻遏物(Ikappa BalphaSR)的组成性表达证实,这些信号体依赖性靶基因也依赖于NF-kappaB。在没有外源刺激的情况下,NF-kappaB靶基因的一个子集是IKK依赖性的,这表明在已建立的MEF中也需要信号体来调节活化的NF-kampaB的基础水平。总的来说,已鉴定出大量新的NF-kappaB/IKK依赖基因,包括分泌型Frizzled、钙粘蛋白13、原钙粘蛋白7、CCAAT/增强子结合蛋白-beta和-delta、骨保护素、FOXC2和FOXF2、BMP-2、p75神经营养素受体、caspase-11、鸟苷酸结合蛋白1和2、ApoJ/聚集素、干扰素(α和β)受体2、核心蛋白、骨聚糖、表调节蛋白、增殖素2和3、基质细胞衍生因子以及组织蛋白酶B、F和Z。SOCS-3是STAT3信号传导的负效应器,被发现是NF-kappaB/IKK诱导的基因,表明IKK介导的NF-kapbaB激活可以协调对STAT信号传导的非法负效应。

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图1
图1
NF-κB依赖性/TNFα刺激MEF中靶基因在存在或不存在单个信号体亚单位的情况下的基因表达模式的层次聚类图。在2小时TNFα刺激的Wt.MEFs(1和2道)与组成性表达IκBα(SS32/36AA)超阻遏物(9和10道)的Wt.MEFs的初级微阵列筛选中,所有基因的表达谱显示诱导2倍或更多和平均差异增加(如实验程序所述)与TNFα刺激的(S)IKKα(−/−)(车道3和4)、IKKβ(−/-)(车道5和6)和NEMO/IKKγ(−/o)(通道7和8)以及未刺激的(US)Wt.MEF(车道11)相比,被提交到层次聚类。表一显示了所选基因的位置及其折叠变化值。
图2
图2
TaqMan实时PCR验证基因芯片筛查中选择的诱导点击。从野生型和突变型MEF中分离出总的细胞RNA,在TNFα和/或IL-1刺激下培养2小时。使用TaqMan定量进行RT和PCR(显示40 ng总RNA中检测到的mRNA拷贝数)。根据DNA标准测定基因转录物的拷贝数,并用Gapdh标准化(见实验程序)。每个单独样品的所有TaqMan PCR反应一式三份进行,然后确定拷贝数和标准误差。
图3
图3
半定量RT-PCR揭示了TNFα刺激后2小时内选定MEF基因的IKKα和IKKβ需求。所有RT-PCR均在每个转录物的线性反应范围内进行(与GAPDH参考对照相比),产物在6%聚丙烯酰胺凝胶电泳上进行解析,并通过溴化乙锭染色显示。RT-PCR至少进行了三次独立的试验,结果与实验程序中描述的结果相似。

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引用人

参考文献

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