Beta 3-adrenoceptor in rat aorta: molecular and biochemical characterization and signalling pathway

doi:10.1038/sj.bjp.0704867

.2002年9月；137(2):153-61.

doi:10.1038/sj.bjp.0704867。

大鼠主动脉β3-肾上腺素受体：分子生化特征和信号通路

约汉·劳图鲁¹, 吉尔斯·图马尼安茨, 萨布丽娜·塞皮隆, 菲利普·乔登, Jean-Noél Trochu女士, Chantal Gauthier公司

附属公司

PMID： 12208771
PMCID公司：项目经理1573490
内政部： 10.1038/sj.bjp.0704867

大鼠主动脉β3-肾上腺素受体：分子生化特征和信号通路

约汉·劳图鲁等人。杂志. 2002年9月.

.2002年9月；137(2):153-61.

doi:10.1038/sj.bjp.0704867。

作者

约汉·劳图鲁¹, 吉尔斯·图马尼安茨, 萨布丽娜·塞皮隆, 菲利普·乔登, Jean-Noél Trochu女士, Chantal Gauthier公司

附属

¹法国南特Hótel-Dieu，INSERM U533，Physiopathologie et de Pharmacologie Cellulaires et Moléculaires实验室。

PMID： 12208771
PMCID公司：项目经理1573490
内政部： 10.1038/sj.bjp.0704867

摘要

1.我们之前已经证明，β（3）-肾上腺素能受体（β（3AR）刺激通过激活与细胞内cGMP增加相关的内皮一氧化氮合酶，在大鼠主动脉中诱导内皮依赖性血管舒张。本研究的目的是定位β（3）-AR，以证实我们的功能性研究，并完成大鼠主动脉中β（3”-AR的信号通路。2.通过RT-PCR，我们在主动脉和新鲜分离的内皮细胞中检测到β（3）-AR转录物。内皮细胞中缺乏腺苷或激素敏感脂肪酶标记物，排除了脂肪细胞中存在β（3）-AR。用大鼠β（3）-AR抗体通过免疫组织化学方法证实了β（3AR）-AR在主动脉内皮细胞中的定位。3.为了鉴定与β（3）-AR相关的G蛋白，在预先用G（i/0）蛋白抑制剂PTX（10 microg kg（-1））治疗的大鼠中进行了实验。PTX对G（i/0）蛋白的阻断通过选择性α（2）-AR激动剂UK 14304诱导的血管舒张减少得到证实。β（3）-AR激动剂SR 58611A在PTX预处理大鼠主动脉环上的累积浓度-反应曲线没有显著改变。4.在相同收缩水平下，与苯肾上腺素（0.3 microM）预收缩环相比，10 microM SR 58611A诱导的舒张作用在30 mM-KCl预收缩环中显著降低（E（max）=16.7+/-8.4%，n=5）（E（max）=49.11+/-11.0%，n=5，P<0.05）。此外，伊贝罗毒素（0.1μM）、格列本脲（1μM）和4-氨基吡啶（1 mM）分别是选择性钾通道阻滞剂K（Ca）、K（ATP）和K（v），可降低SR 58611A介导的舒张作用。5.我们得出结论，β（3）-AR在大鼠主动脉内皮细胞中优先表达。β（3）-AR介导的主动脉舒张不依赖于G（i/0）蛋白的刺激，但由几个钾通道K（Ca）、K（ATP）和K（v）的激活引起。

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数字

图1
β的RT-PCR检测_三-白色脂肪组织、心脏、胸主动脉和新分离的主动脉内皮细胞中的AR和己二醛基因转录物。扩增的cDNA片段在2%琼脂糖凝胶上分离，并用溴化乙锭染色进行可视化。PCR产品的尺寸显示在面板的左右两侧。M： 100 pb梯子（新英格兰生物实验室）；NRT：无逆转录；RT：逆转录；β_三-AR：β_三-肾上腺素受体；WAT：白色脂肪组织；托尔。主动脉：胸主动脉；恩多。细胞：内皮细胞。

图2
血管性血友病因子（A）和β的比较_三-AR在大鼠胸主动脉中的表达（B）。用血管性血友病抗体（vWf-Ab；A）或大鼠β_三-AR抗体（rβ_三-AR抗体；B）过氧化物酶结合第二抗血清显示。黑色箭头显示内皮细胞被vWf和rβ强烈染色_三-AR抗体（A–B）。预吸收rβ后的相同染色_三-带有阻断肽（rβ）的AR Ab_三-AR抗体+B肽。；C） ●●●●。显微镜X100。

图3
α的抑制₂-AR诱导的PTX预处理大鼠胸主动脉环松弛。大鼠静脉注射生理盐水（假手术）或PTX 10μg kg⁻¹（预处理）实验前3天。UK 14304对0.01至1μ浓度范围内的松弛剂作用的典型记录M（M）假手术大鼠（A）和PTX预处理大鼠（B）的主动脉环。（C）假手术大鼠主动脉环中UK 14304的浓度反应曲线(n个=7）和PTX预处理大鼠(n个=8). 结果表示为苯肾上腺素引起的稳态收缩水平的松弛百分比。每一点都是n个实验中，垂直线显示了平均值的s.e。如果没有显示错误栏，则错误小于符号**P（P）*<0.05和***P（P）*<0.01表示与对照组有显著差异。两条曲线都有显著差异（双向方差分析）。

图4
PTX预处理对β_三-AR诱导的大鼠主动脉舒张。大鼠静脉注射生理盐水（假手术）或PTX 10μg kg⁻¹（预处理）实验前3天。SR 58611A对0.1至30μl浓度范围内的松弛剂作用的典型记录M（M）假手术大鼠（A）和PTX预处理大鼠（B）的主动脉环。（C） SR 58611A在假手术大鼠主动脉环中的浓度响应曲线(n个=7）和PTX预处理大鼠(n个=8). 显示了经PTX预处理或未经PTX处理的对照血管的自发松弛减法所得的平均曲线。结果表示为苯肾上腺素引起的稳态收缩水平的松弛百分比。每一点都是n个实验中，垂直线显示了平均值的s.e。如果没有显示错误栏，则错误小于符号**P（P）*<0.05和***P（P）*<0.01表示与对照组有显著差异。

图5
β的抑制_三-AR通过高细胞外钾浓度诱导大鼠主动脉舒张。SR 58611A在10至30μ浓度范围内的典型记录M（M）在用苯肾上腺素（PE）（A）或KCl（B）预缩的环上。这些记录在五个实验的每个案例中都具有代表性。

图6
β的抑制_三-钾通道阻滞剂对大鼠主动脉的肾上腺素能舒张作用。显示了减去预处理或未用钾通道阻滞剂处理的对照血管的自发松弛后的平均曲线。（A）无SR 58611A的浓度响应曲线(n个=9）且存在0.1μM（M）野山羊毒素(n个=8）苯肾上腺素收缩大鼠胸主动脉环。（B） SR 58611A（无）的浓度响应曲线(n个=21）和1μM（M）格列本脲(n个=6）或100μM（M）甲苯磺丁脲(n个=6）在用苯肾上腺素收缩的大鼠胸主动脉环中。（C） SR 58611A（无）的浓度响应曲线(n个=21）且存在1 mM（M）4-氨基吡啶(n个=7）苯肾上腺素收缩大鼠胸主动脉环。结果表示为苯肾上腺素引起的稳态收缩水平的松弛百分比。每一点都是n个实验中，垂直线显示了平均值的s.e。如果没有显示错误栏，则错误小于符号**P（P）*<0.05和***P（P）*<0.01表示与对照组有显著差异。

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1. BITTENCOURT J.C.、PRESSE F.、ARIAS C.、PETO C.、VAUGHAN J.、NAHON J.L.、VALE W.、SAWCHENKO P.E.大鼠大脑的黑色素浓缩激素系统：免疫和杂交组织化学特征。J.公司。神经醇。1992;319:218–245.-公共医学
1. CHOMCZYNSKI P.，SACCHI N.通过酸性硫氰酸胍-酚-氯仿萃取分离RNA的单步方法。分析。生物化学。1987;162:156–159.-公共医学
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