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.2002年6月;1(6):451-65.
doi:10.1074/mcp.m200037-mcp200。

人类纤毛的蛋白质组学分析:新成分的鉴定

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人类纤毛的蛋白质组学分析:新成分的鉴定

劳伦斯·奥斯特罗斯基等人。 分子细胞蛋白质组学. 2002年6月.
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摘要

纤毛通过提供清除粘液纤毛所需的力量,在保护呼吸道方面发挥着重要作用。虽然已经描述了人类纤毛的主要结构成分,但要全面了解纤毛的功能和调节,需要对所有纤毛成分进行鉴定和表征。根据对鞭毛衣原体的研究估计,轴丝含有≥250个蛋白质。为了鉴定人类纤毛的所有成分,我们已经开始对分离的纤毛轴突进行全面的蛋白质组学分析。通过二维(2-D)聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析,得到了由240多个分辨率良好的成分组成的高度可重复的2-D图谱。用胰蛋白酶消化单个蛋白点,并使用液相色谱/串联质谱(LC/MS/MS)进行测序。通过这种方法获得了38个潜在纤毛蛋白的肽匹配。为了鉴定2-D-PAGE无法解析的睫状体成分,在一维凝胶上分离轴突蛋白。凝胶通道被分成45个单独的切片,每个切片都通过LC/MS/MS进行分析。该实验使肽与另外110个蛋白质相匹配。在第三种方法中,用Lys-C消化分离的轴突,并通过LC/MS/MS或多维LC/MS/MS直接分析产生的肽,从而鉴定出另外66个蛋白质。这四种方法中的每一种都能鉴定出存在的蛋白质的一个子集。总共获得了1400多肽的序列数据,并鉴定了200多个潜在的轴突蛋白。还获得了200多个人类表达序列标签的肽匹配。作为验证质谱结果的一种方法,其他研究检查了纤毛或纤毛细胞中几种已鉴定蛋白质(膜联蛋白I、精子蛋白Sp17、视网膜色素变性蛋白RP1)的表达。这些研究首次对人类睫状体轴丝进行蛋白质组学分析,并确定了这种复杂细胞器的许多潜在新成分。

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