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2002年3月26日;2002年(125):第3页。
doi:10.1126/stke.2002.125.pl3。

用GFP融合蛋白模块可视化细胞磷脂池

附属公司

用GFP融合蛋白模块可视化细胞磷脂池

塔马斯·巴拉等。 科学STKE

摘要

肌醇磷脂因其在钙信号传导中的关键作用而广为人知,是对各种刺激产生的重要第二信使的前体。然而,在过去的10年里,肌醇也作为普遍的信号成分出现在真核细胞的几乎每个膜上。这些脂质由大量肌醇激酶和磷酸酶在局部产生和降解,以控制特定膜室中蛋白质信号复合物的募集和活性。细胞肌醇变化所受到的空间和时间限制,给寻找检测这种变化的实验技术带来了新的挑战。利用进化选择的蛋白质结构域识别细胞磷脂酰肌醇,我们将这些结构域融合到绿色荧光蛋白(EGFP)的改进版本中,从而创建了荧光分子;可以跟踪这些融合蛋白在活细胞内的分布,从而报告磷脂酰肌醇的变化。尽管这项技术是为数不多的以亚细胞分辨率提供活细胞中磷脂酰肌醇动力学信息的技术之一,并迅速普及,但在解释数据时也有需要考虑的局限性。在这里,我们总结了我们在设计和使用这些结构方面的经验,并回顾了我们对通过这种技术获得的数据的解释的立场。

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