Cloning and characterization of the rat homologues of the Inhibitor of Apoptosis protein 1, 2, and 3 genes

doi:10.1186/1471-2164-3-5

.2002:3:5.

doi:10.1186/1471-2164-3-5。 Epub 2002年2月11日。

凋亡抑制蛋白1、2和3基因大鼠同源物的克隆和鉴定

马丁·霍尔西克¹, 查尔斯·A·列斐伏尔, 凯科·希克斯, 罗伯特·G·科内卢克

附属公司

PMID： 11860601
预防性维修识别码： PMC65541型
内政部： 10.1186/1471-2164-3-5

凋亡抑制蛋白1、2和3基因大鼠同源物的克隆和鉴定

马丁·霍尔西克等人。 BMC基因组学. 2002.

.2002:3:5.

doi:10.1186/1471-2164-3-5。 Epub 2002年2月11日。

作者

马丁·霍尔西克¹, 查尔斯·A·列斐伏尔, 凯科·希克斯, 罗伯特·G·科内卢克

附属

¹Solange G，加拿大渥太华东安大略研究院儿童医院Karsh分子遗传学实验室。martin@mgcheo.med.uottawa.ca

PMID： 11860601
预防性维修识别码： PMC65541型
内政部： 10.1186/1471-2164-3-5

摘要

背景：凋亡抑制蛋白（IAP）是多种触发因子诱导细胞凋亡的关键内在调节因子。我们分离了大鼠凋亡抑制基因1、2和3，并对其组织分布和表达进行了表征。

结果：大鼠iap-1编码67.1kDa的蛋白质，与人类和小鼠iap-1的同源性分别为73%和89.2%。大鼠iap-2编码一种66.7kDa的蛋白质，与人和小鼠iap-2的同源性分别为81.6%和89.3%。大鼠iap-3编码56.1kDa的蛋白质，与人和小鼠iap-3的同源性分别为89.5%和93.1%。我们已经产生了针对所有三种大鼠IAP基因的兔多克隆抗体。Northern和Western印迹分析检测到大鼠IAP转录物和蛋白质在大多数被检测组织中。此外，在睾丸中发现了与iap-2相对应的较短的选择性剪接转录本。

结论：我们已经鉴定了IAP基因的三个大鼠同源物。大鼠睾丸中iap-1和iap2的高表达表明这两个基因在精子发生中起着重要的抗凋亡作用。

PubMed免责声明

数字

图1
(一)大鼠的Northern印迹分析*内部审计程序*成年大鼠组织中mRNA的表达。含有2μg/lane poly（A）的大鼠多组织northern印迹（Clontech）⁺核糖核酸每车道被依次探测[³²P] 来自大鼠编码区的dCTP（Amersham）标记的随机引物DNA探针*iap-1型*,*iap-2*,*iap-3，*β-肌动蛋白（对照）。在5×SSPE/10×Denhardt’s溶液/100μg/ml鲑鱼精子DNA/50%甲酰胺/2%十二烷基硫酸钠中杂交一晚，然后在50℃下用0.2×SSC/0.1%十二烷基硫酸钾洗涤。标记的位置和大小显示在左侧。印迹上显示的组织如下：(1)心脏(2)大脑(三)脾脏(4)肺(5)肝脏(6)骨骼肌(7)肾脏，以及(8)睾丸。(B类)Northern blot分析*内部审计程序*-睾丸2例。将大鼠多组织Northern印迹（Clontech；与（A）中相同）与[³²P] dCTP标记的DNA探针*内部审计程序*-2编码区、BIR域和RING zing指。按照（A）处理斑点。睾丸特异性转录本的位置用星号表示(^*).

图2
大鼠IAP蛋白在成年大鼠组织中分布的Western blot分析。从新鲜成年大鼠组织或细菌表达的GST融合重组蛋白制备的蛋白质样品在10%SDS-PAGE上分离（总蛋白12μg每并使用标准技术转移到PVDF膜上[20]。兔抗大鼠多克隆抗体*iap-1型*（顶部），*iap-2*（中间），和*iap-3*（底部）使用1:1000稀释度，然后使用1:1500稀释度的二级抗体（辣根过氧化物酶结合山羊抗兔IgG；Amersham）。使用ECL系统（Amersham）检测抗体复合物。标记的位置和大小显示在左侧。（注意，由于N-末端GST标签的存在，重组GST融合蛋白更大。）所用组织如下：(1)大脑(2)心脏(三)肠(4)肾脏(5)肝脏(6)肺(7)脾脏(8)睾丸，和(9)胸腺。

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