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.2002年2月15日;398(2):160-9.
doi:10.1006/abbi.2001.2710。

胰岛β细胞核苷二磷酸激酶线粒体亚型的定位和表征:其与线粒体琥珀酰辅酶A合成酶复合的证据

附属公司

胰岛β细胞核苷二磷酸激酶线粒体亚型的定位和表征:其与线粒体琥珀酰辅酶A合成酶复合的证据

Anjaneyulu Kowluru公司等。 Arch Biochem生物物理. .

摘要

核苷二磷酸激酶(NDPK)催化末端磷酸盐从三磷酸核苷转移到二磷酸核苷,生成三磷酸核苷酸。本研究旨在定位和表征胰腺β细胞中NDPK的线粒体异构体(mNDPK),因为它有助于线粒体核苷酸三磷酸盐的产生,从而促进胰腺β细胞的线粒体高能磷酸盐代谢。通过差速离心分离胰岛素分泌β细胞的线粒体部分。mNDPK活性测定为ATPgammaS和GDP形成的[3)H]GTPgammaS]量。将分离的线粒体提取物与[gamma-(32)P]ATP或GTP孵育,可形成[32)P]NDPK,其可通过抗NDPK血清进行免疫沉淀。mNDPK在其核苷二磷酸受体和核苷三磷酸供体方面表现出饱和动力学,并且对已知的NDPK抑制剂(例如,尿苷二磷酸和色甘酸)敏感。通过Western blot分析,在β细胞的不同亚细胞组分中至少鉴定出三种NDPK亚型。nm23-H1(NDPK-A)主要是可溶的,而nm23-H2(NDPK-B)与可溶部分和膜部分相关。NDPK的线粒体亚型nm23-H4均匀分布在β细胞线粒体亚组分中。用琥珀酰辅酶A合成酶(SCS)抗血清沉淀的线粒体部分的免疫沉淀物中回收了大量NDPK(由催化活性和免疫学方法确定),表明NDPK可能仍与SCS络合。我们首次证明了NDPK的线粒体亚型在胰岛β细胞中的定位,从而为生成线粒体内GTP提供了一种潜在的机制,与ATP不同,GTP不通过经典的核苷酸转位酶转运到线粒体。还需要进一步的研究来确定NDPK/SCS复合物在胰岛素分泌中对正常β细胞功能的重要性。

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