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.2001年10月；34（第4部分第1）:688-93。
doi:10.1053/jhep.2001.27811。

大鼠肝部分切除术后肝细胞生长因子/分散因子的加工和利用

P绦虫 1, J C Lopez-Talavera公司, B彼得森, S P蒙加, G K米哈洛普洛斯
附属公司

大鼠肝部分切除术后肝细胞生长因子/分散因子的加工和利用

P绦虫等。 肝病学. 2001年10月.

摘要

肝细胞生长因子/分散因子（HGF/SF）是一种多功能生长因子，能够作为动力原、形态原和有丝分裂原发挥作用。最初，HGF/SF被发现是肝细胞的血载有丝分裂原，后来被确定在肝脏修复中非常重要。以前的研究已经证实，HGF/SF必须进行蛋白质水解才能发挥其作用。四氯化碳等毒素造成肝脏损伤后，或手术切除、部分肝切除术（PHX）后，血液中HGF/SF浓度增加。本研究的目的是检查（1）正常肝脏中存在哪种形式的HGF/SF，（2）PHX后再生肝脏中存在何种形式的HGF/SF，以及（3）PHX之后使用的HGF/SF是否来源于现有的肝脏贮存器。正常肝脏中存在单链HGF/SF和活性双链HGF/SF，前者是主要形式。PHX后，肝脏可被描述为内源性HGF/SF的使用有两个阶段。从0到3小时的第一阶段是消耗阶段，其特征是单链HGF/SF和活性双链HGF/SF均减少。第二阶段是生产阶段。其特点是单链HGF/SF和双链HGF/SF的显著再现。在生产阶段，激活指数比假手术增加了5倍。使用放射性标记的HGF/SF表明，在最初的3小时内，HGF/SF部分用于肝脏储备。此外，在PHX后的前3小时内，血浆中只发现活性的双链HGF/SF。

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图1
图1
全肝匀浆中内源性HGF/SF的Western blot。（A） 动物接受PHX或假手术。按照材料和方法中的描述，在指定的时间从相应的动物身上获取组织并进行均质化。用10%Tris-tricine PAGE分析不同时间点的300微克总肝匀浆。纯化的大鼠tcHGF/SF被用作hcHGF/SF的标准。如下图所示，肌动蛋白的Western印迹证实了载荷相等。在对三个单独的Western blot实验进行密度分析后，将给定时间点对应于scHGF/SF或hcHGF/SF的条带的积分光密度（IOD）归一化为来自同一blot的零时间点。数值表示为标准化平均值（IOD）±SEM。对假手术组和PHX组的scHGF/SF（B）或hcHGF/SF（C）进行了比较。
图2
图2
PHX后预加载HGF/SF的命运。（A） 用10%Tris-tricine PAGE分析标记的HGF/SF样品（3 ng），用于标记大鼠肝脏。代表HGF/SF的谱带标记为scHGF/SB或hcHGF/SP。125在PHX前24小时将I-HGF/SF注入肠系膜静脉。在PHX或假手术后的指定时间，采集肝脏，并测定其比活性（cpm/μg）。针对每个实验集，将特定活动数据标准化为零时间点。（B） 数据代表3组实验动物的肝脏平均比活性±SEM
图3
图3
PHX后血液中内源性HGF/SF的形式。按照材料和方法中的描述，在PHX和血浆制备后的指定时间从两只动物身上采集血液。将每个时间点总计13 mL的血浆加载到肝素琼脂糖柱上。用1.2 mol/L NaCl洗脱结合蛋白，并按照材料和方法中的描述提取。然后在10%三嗪丙烯酰胺凝胶上对样品进行拆分，并将其吸光至聚二氟乙烯膜上。参考通道由纯化的大鼠tcHGF/SF组成，并标记hcHGF/SF。
图4
图4
内源性HGF/SF激活指数。比较PHX和半手术动物的hcHGF/SF与scHGF/SF的比值。活化指数由图1B和C中的归一化值构成。
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