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.2001年10月1日；194(7):1013-20.
doi:10.1084/jem.194.7.1013。

白细胞介素15使单核细胞分化为具有朗格汉斯细胞特征的树突状细胞

穆罕默德扎德 1, F贝拉德, G Essert公司, C Chalouni公司, B普伦德兰, J Davout公司, G桥梁, A K帕卢卡, J班切罗
附属公司

白细胞介素15使单核细胞分化为具有朗格汉斯细胞特征的树突状细胞

穆罕默德扎德等。 实验医学杂志. .

摘要

郎格罕细胞（LC）是一种未成熟树突状细胞（DC）的亚群，特异性定位于表皮和其他粘膜上皮。由于周围的角质形成细胞可以产生白细胞介素（IL）-15，这是一种利用IL-2Rgamma链的细胞因子，我们分析了IL-15是否可以将单核细胞分化为淋巴细胞。用粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和IL-15培养6d的单核细胞分化为CD1a（+）HLA-DR（+）CD14（-）DC（IL15-DC）。脂多糖（LPS）、肿瘤坏死因子（TNF）α和CD40L等药物诱导IL15-DC成熟为CD83（+）、DC-LAMP（+）细胞。IL15-DC是强大的抗原呈递细胞，能够诱导初级（混合淋巴细胞反应[MLR]）和次级（对氟基质肽的回忆反应）免疫反应。与用GM-CSF/IL-4（IL4-DC）培养相比，IL15-DC中有一部分表达LC标记：E-Cadherin、Langerin和CC趋化因子受体（CCR）6。因此，IL15 DC，而不是IL4 DC，响应巨噬细胞炎症蛋白（MIP）-3α/CL20迁移。然而，IL15-DC不能被认定为“真正的”朗格汉斯细胞，因为尽管存在43-kD朗格林，但它们并不表达真正的Birbeck颗粒。因此，我们的结果证明了单核细胞分化为树突状细胞的新途径。

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数字

图1
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IL-15和GM-CSF使单核细胞分化为DC，具有LC的特征。（A） 纯化的单核细胞与GM-CSF/IL-4（IL4-DC）或GM-CSF/IL-15（IL15-DC）培养6天。两种培养物显示出相似的SSC/FSC特性（左侧面板）。IL15-DC获得CD1a，失去CD14，属于HLA-DR+（右侧面板），类似于IL4-DC（未显示）。（B） IL15-DC（粗体）获得成熟DC表型（CD40高的，CD83+，CD80高的，CD86高的和HLA-DR高的)与LPS（100 ng/ml）培养时（虚线）。细实线表示同型控制。（C） 一些IL15-DC表达细胞内DC-LAMP，其表达受到LPS激活的显著上调（共焦显微镜，视野130×100μm）。（D） IL15-DC，而不是IL4-DC，表达表达E-Cadderin、CCR6和Langerin的LC的表面表型。相反，IL4-DC（而不是IL15-DC）表达高水平的CD9、CD11b、CD32和CD36。纯化的单核细胞培养6天，用指示的抗体染色，并用流式细胞仪进行分析。（E） IL15-DC中Langerin的免疫印迹检测。将SDS-凝胶的蛋白质转移到免疫斑点上®PVDF膜和这些膜使用抗Langerin和ECL Western印迹检测系统进行染色。通道1：T细胞；车道2:IL4-DC；车道3:IL15-DC。（F） 与GM-CSF/IL-4/TGF-β1培养的单核细胞相比，GM-CSF/IL-15培养的单细胞显示出较高的Langerin表达（四个实验的代表性）。
图1
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IL-15和GM-CSF使单核细胞分化为DC，具有LC的特征。（A） 纯化的单核细胞与GM-CSF/IL-4（IL4-DC）或GM-CSF/IL-15（IL15-DC）培养6天。两种培养物显示出相似的SSC/FSC特性（左侧面板）。IL15-DC获得CD1a，失去CD14，属于HLA-DR+（右侧面板），类似于IL4-DC（未显示）。（B） IL15-DC（粗体）获得成熟DC表型（CD40高的，CD83+，CD80高的，CD86高的和HLA-DR高的)与LPS（100 ng/ml）培养时（虚线）。细实线表示同型控制。（C） 一些IL15-DC表达细胞内DC-LAMP，其表达受到LPS激活的显著上调（共焦显微镜，视野130×100μm）。（D） IL15-DC，而不是IL4-DC，表达表达E-Cadderin、CCR6和Langerin的LC的表面表型。相反，IL4-DC（而不是IL15-DC）表达高水平的CD9、CD11b、CD32和CD36。纯化的单核细胞培养6天，用指示的抗体染色，并用流式细胞仪进行分析。（E） IL15-DC中Langerin的免疫印迹检测。将SDS-凝胶的蛋白质转移到免疫斑点上®PVDF膜和这些膜使用抗Langerin和ECL Western印迹检测系统进行染色。通道1：T细胞；车道2:IL4-DC；车道3:IL15-DC。（F） 与GM-CSF/IL-4/TGF-β1培养的单核细胞相比，GM-CSF/IL-15培养的单细胞显示出较高的Langerin表达（四个实验的代表性）。
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IL-15和GM-CSF使单核细胞分化为DC，具有LC的特征。（A） 纯化的单核细胞与GM-CSF/IL-4（IL4-DC）或GM-CSF/IL-15（IL15-DC）培养6天。两种培养物显示出相似的SSC/FSC特性（左侧面板）。IL15-DC获得CD1a，失去CD14，属于HLA-DR+（右侧面板），类似于IL4-DC（未显示）。（B） IL15-DC（粗体）获得成熟DC表型（CD40高的，CD83+，CD80高的，CD86高的和HLA-DR高的)与LPS（100 ng/ml）培养时（虚线）。细实线表示同型控制。（C） 一些IL15-DC表达细胞内DC-LAMP，其表达受到LPS激活的显著上调（共焦显微镜，视野130×100μm）。（D） IL15-DC，而不是IL4-DC，表达表达E-Cadderin、CCR6和Langerin的LC的表面表型。相反，IL4-DC（而不是IL15-DC）表达高水平的CD9、CD11b、CD32和CD36。纯化的单核细胞培养6天，用指示的抗体染色，并用流式细胞仪进行分析。（E） IL15-DC中Langerin的免疫印迹检测。将SDS-凝胶的蛋白质转移到免疫斑点上®PVDF膜和这些膜使用抗Langerin和ECL Western印迹检测系统进行染色。通道1：T细胞；车道2:IL4-DC；车道3:IL15-DC。（F） 与GM-CSF/IL-4/TGF-β1培养的单核细胞相比，GM-CSF/IL-15培养的单细胞显示出较高的Langerin表达（四个实验的代表性）。
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IL-15和GM-CSF使单核细胞分化为DC，具有LC的特征。（A） 纯化的单核细胞与GM-CSF/IL-4（IL4-DC）或GM-CSF/IL-15（IL15-DC）培养6天。两种培养物显示出相似的SSC/FSC特性（左侧面板）。IL15-DC获得CD1a，失去CD14，属于HLA-DR+（右侧面板），类似于IL4-DC（未显示）。（B） IL15-DC（粗体）获得成熟DC表型（CD40高的，CD83+，CD80高的，CD86高的和HLA-DR高的)与LPS（100 ng/ml）培养时（虚线）。细实线表示同型控制。（C） 一些IL15-DC表达细胞内DC-LAMP，其表达受到LPS激活的显著上调（共焦显微镜，视野130×100μm）。（D） IL15-DC，而不是IL4-DC，表达表达E-Cadderin、CCR6和Langerin的LC的表面表型。相反，IL4-DC（而不是IL15-DC）表达高水平的CD9、CD11b、CD32和CD36。纯化的单核细胞培养6天，用指示的抗体染色，并用流式细胞仪进行分析。（E） IL15-DC中Langerin的免疫印迹检测。将SDS-凝胶的蛋白质转移到免疫斑点上®PVDF膜和这些膜使用抗Langerin和ECL Western印迹检测系统进行染色。通道1：T细胞；车道2:IL4-DC；车道3:IL15-DC。（F） 与GM-CSF/IL-4/TGF-β1培养的单核细胞相比，GM-CSF/IL-15培养的单细胞显示出较高的Langerin表达（四个实验的代表性）。
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IL-15和GM-CSF使单核细胞分化为DC，具有LC的特征。（A） 纯化的单核细胞与GM-CSF/IL-4（IL4-DC）或GM-CSF/IL-15（IL15-DC）培养6天。两种培养物显示出相似的SSC/FSC特性（左侧面板）。IL15-DC获得CD1a，失去CD14，属于HLA-DR+（右侧面板），类似于IL4-DC（未显示）。（B） IL15-DC（粗体）获得成熟DC表型（CD40高的，CD83+，CD80高的，CD86高的和HLA-DR高的)与LPS（100 ng/ml）培养时（虚线）。细实线表示同型控制。（C） 一些IL15-DC表达细胞内DC-LAMP，其表达受到LPS激活的显著上调（共焦显微镜，视野130×100μm）。（D） IL15-DC，而不是IL4-DC，表达表达E-Cadderin、CCR6和Langerin的LC的表面表型。相反，IL4-DC（而不是IL15-DC）表达高水平的CD9、CD11b、CD32和CD36。纯化的单核细胞培养6天，用指示的抗体染色，并用流式细胞仪进行分析。（E） IL15-DC中Langerin的免疫印迹检测。将SDS-凝胶的蛋白质转移到免疫斑点上®PVDF膜和这些膜使用抗Langerin和ECL Western印迹检测系统进行染色。通道1：T细胞；车道2:IL4-DC；车道3:IL15-DC。（F） 与GM-CSF/IL-4/TGF-β1培养的单核细胞相比，GM-CSF/IL-15培养的单细胞显示出较高的Langerin表达（四个实验的代表性）。
图1
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IL-15和GM-CSF使单核细胞分化为DC，具有LC的特征。（A） 纯化的单核细胞与GM-CSF/IL-4（IL4-DC）或GM-CSF/IL-15（IL15-DC）培养6天。两种培养物显示出相似的SSC/FSC特性（左侧面板）。IL15-DC获得CD1a，失去CD14，属于HLA-DR+（右侧面板），类似于IL4-DC（未显示）。（B） IL15-DC（粗体）获得成熟DC表型（CD40高的，CD83+，CD80高的，CD86高的和HLA-DR高的)与LPS（100 ng/ml）培养时（虚线）。细实线表示同型控制。（C） 一些IL15-DC表达细胞内DC-LAMP，其表达受到LPS激活的显著上调（共焦显微镜，视野130×100μm）。（D） IL15-DC，而不是IL4-DC，表达表达E-Cadderin、CCR6和Langerin的LC的表面表型。相反，IL4-DC（而不是IL15-DC）表达高水平的CD9、CD11b、CD32和CD36。纯化的单核细胞培养6天，用指示的抗体染色，并用流式细胞仪进行分析。（E） IL15-DC中Langerin的免疫印迹检测。将SDS-凝胶的蛋白质转移到免疫斑点上®PVDF膜和这些膜使用抗Langerin和ECL Western印迹检测系统进行染色。通道1：T细胞；车道2:IL4-DC；车道3:IL15-DC。（F） 与GM-CSF/IL-4/TGF-β1培养的单核细胞相比，GM-CSF/IL-15培养的单细胞显示出较高的Langerin表达（四个实验的代表性）。
图2
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IL15树突状细胞对MIP-3α的迁移反应/CCL20型MIP-3α被添加到趋化室的下孔中。IL15-或IL4-DC（105/80μl）施加于腔室的上孔，用标准的5μm孔无聚乙烯吡咯烷酮聚碳酸酯隔开下孔。将培养箱在37°C下培养3 h。收集并计数迁移至下孔的细胞。每项试验均一式三份，结果表示为迁移细胞的平均±SD数（代表两项试验）。
图3
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IL15-DC呈现CD4抗原+T细胞。（A） 与GM-CSF/IL-15、GM-CSF/IL-4、GM-CSSF/IL-4/TGF-β1或GM-CSF单独培养的单核细胞的异体刺激能力。异基因CD4的增殖+T细胞（105)用分级剂量的抗原呈递细胞培养5d，由胸腺嘧啶核苷摄取量决定。（B） TT（4 LFU/ml）脉冲IL15-DC诱导自体CD4增殖+T细胞（105)在第5天通过胸腺嘧啶核苷掺入测定。三个实验的代表。
图3
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IL15-DC呈现CD4抗原+T细胞。（A） 与GM-CSF/IL-15、GM-CSF/IL-4、GM-CSSF/IL-4/TGF-β1或GM-CSF单独培养的单核细胞的异体刺激能力。异基因CD4的增殖+T细胞（105)用分级剂量的抗原呈递细胞培养5d，由胸腺嘧啶核苷摄取量决定。（B） TT（4 LFU/ml）脉冲IL15-DC诱导自体CD4增殖+T细胞（105)在第5天通过胸腺嘧啶核苷掺入测定。三个实验的代表。
图4
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IL15-DC呈现CD8抗原+T细胞。（A） 未成熟IL-15 DC诱导异基因CD8的大量增殖+T细胞。CD8（CD8）+T细胞（105)用分级剂量的IL15-DC培养，增殖通过胸腺嘧啶掺入来确定。（B） IL15-DC诱导高频率的Flu-MP四聚体阳性CD8+T细胞。自体CD8+T细胞与HLA-A201和用Flu-MP肽脉冲的活化IL15-或IL4-DC一起培养。在两次刺激后（培养14天，第一周为IL-7，第二周为IL-2），CD8+收获T细胞并用抗CD3-FITC、抗CD8-PE和Flu-MP-HLA-A201 I类四聚体APC染色。三个实验的代表。（C） CD8的CTL活性+用HLA-A201和用Flu-MP肽脉冲的IL15-或IL4-DC培养的T细胞。如上所述激活T细胞，并使用Flu-MP脉冲T2细胞作为靶点（百分比特异性溶解）在铬释放试验中进行测试。K562、未脉冲T2细胞或用无关肽脉冲T2作为对照。
图4
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IL15-DC呈现CD8抗原+T细胞。（A） 未成熟IL-15 DC诱导异基因CD8的大量增殖+T细胞。CD8（CD8）+T细胞（105)用分级剂量的IL15-DC培养，增殖通过胸腺嘧啶掺入来确定。（B） IL15-DC诱导高频率的Flu-MP四聚体阳性CD8+T细胞。自体CD8+T细胞与HLA-A201和用Flu-MP肽脉冲的活化IL15-或IL4-DC一起培养。在两次刺激后（培养14天，第一周为IL-7，第二周为IL-2），CD8+收获T细胞并用抗CD3-FITC、抗CD8-PE和Flu-MP-HLA-A201 I类四聚体APC染色。三个实验的代表。（C） CD8的CTL活性+用HLA-A201和用Flu-MP肽脉冲的IL15-或IL4-DC培养的T细胞。如上所述激活T细胞，并使用Flu-MP脉冲T2细胞作为靶点（百分比特异性溶解）在铬释放试验中进行测试。K562、未脉冲T2细胞或用无关肽脉冲T2作为对照。
图4
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IL15-DC呈现CD8抗原+T细胞。（A） 未成熟IL-15 DC诱导异基因CD8的大量增殖+T细胞。CD8（CD8）+T细胞（105)用分级剂量的IL15-DC培养，增殖通过胸腺嘧啶掺入来确定。（B） IL15-DC诱导高频率的Flu-MP四聚体阳性CD8+T细胞。自体CD8+T细胞与HLA-A201和用Flu-MP肽脉冲的活化IL15-或IL4-DC一起培养。在两次刺激后（培养14天，第一周为IL-7，第二周为IL-2），CD8+收获T细胞并用抗CD3-FITC、抗CD8-PE和Flu-MP-HLA-A201 I类四聚体APC染色。三个实验的代表。（C） CD8的CTL活性+用HLA-A201和用Flu-MP肽脉冲的IL15-或IL4-DC培养的T细胞。如上所述激活T细胞，并使用Flu-MP脉冲T2细胞作为靶点（百分比特异性溶解）在铬释放试验中进行测试。K562、未脉冲T2细胞或用无关肽脉冲T2作为对照。
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