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2001年10月26日;276(43):39858-63.
doi:10.1074/jbc。M107302200。 Epub 2001年8月21日。

确定17kDa蛋白激酶C增强抑制蛋白抑制肌球蛋白磷酸酶的结构决定因素和潜在机制

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确定17kDa蛋白激酶C增强抑制蛋白抑制肌球蛋白磷酸酶的结构决定因素和潜在机制

Y Hayashi先生等。 生物化学杂志
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摘要

平滑肌和非肌肉微丝的收缩涉及肌球蛋白II轻链的磷酸化。肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCP)被17 kDa的蛋白激酶C增强抑制剂蛋白(称为CPI-17)特异性抑制,作为血管平滑肌收缩Ca(2+)敏感性的一部分。CPI-17中Thr(38)的磷酸化提高了对MLCP的抑制能力1000倍以上。在本研究中,我们绘制了抑制所需的CPI-17区域,并使用缺失和点突变体研究了其机制。删除N末端34残基或C末端27残基不会改变磷酸或非磷酸CPI-17的IC(50)。然而,进一步删除以获得1-102、1-89、1-76和1-67的CPI-17蛋白,会导致IC(50)值更高。结果表明,在残基35和120之间存在一个最小的抑制域。Tyr(41)处的单个Ala取代消除了磷酸化依赖性抑制,Y41A蛋白中的磷酸化-Thr(38)通过MLCP自身有效地去磷酸化。野生型CPI-17表达于成纤维细胞诱导的肌动球蛋白丝的捆绑和收缩中,而Y41A蛋白的表达无明显影响。因此,CPI-17(35-120)的中心结构域包括磷酸化-Thr(38)是肌球蛋白磷酸酶识别所必需的,Tyr(41)阻止去磷酸化,从而产生抑制。

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