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.2001年4月6日;282(3):683-90.
doi:10.1006/bbrc.2001.4629。

卵母细胞质膜中水通道蛋白-2的检测:一种提高产量和纯度的新分离方法

附属公司

卵母细胞质膜中水通道蛋白-2的检测:一种提高产率和纯度的新分离方法

E J卡姆斯提格等。 生物化学-生物物理研究委员会. .

摘要

水通道蛋白-2(AQP2)水通道突变导致常染色体隐性遗传和显性肾源性尿崩症(NDI)。NDI在卵母细胞中表达,卵母细胞是显性突变(AQP2-E258K),而非隐性突变(AQD2-R187C),NDI仅在低表达水平下对野生型(wt)AQP2透水性(Pf)产生特定的显性负效应。由于在这些水平上,传统分离的质膜的产率太低,因此需要改进技术来半定量质膜中的AQP2。针对AQP2 C环的抗体不适用,因为它们没有特异性,将标签引入该环会导致错误折叠和ER延迟。不透膜生物素类似物被证明标记细胞内AQP2蛋白。因此,已经开发出一种方法,能够产生高产量的近纯质膜,从而能够半定量卵母细胞中低水平表达的质膜蛋白。我们的新方法允许在广泛的通道病中进行表型-基因型相关性研究。

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