Recovery of infectious human parainfluenza type 2 virus from cDNA clones and properties of the defective virus without V-specific cysteine-rich domain

doi:10.1006/viro.2001.0864

.2001年5月25日；284(1):99-112.

doi:10.1006/viro.2001.0864。

从cDNA克隆中回收感染性人副流感2型病毒及无V特异性富含半胱氨酸结构域缺陷病毒的特性

M卡瓦诺¹, M Kaito先生, Y Kozuka公司, H科马达, N野田佳彦, K南坝, M Tsurudome先生, 伊藤, M Nishio先生, 伊藤Y

附属公司

PMID： 11352671
内政部： 2006年10月10日/病毒.2001.0864

免费文章

从cDNA克隆中回收感染性人副流感2型病毒及无V特异性富含半胱氨酸结构域缺陷病毒的特性

M卡瓦诺等。病毒学. 2001.

免费文章

.2001年5月25日；284(1):99-112.

doi:10.1006/viro.2001.0864。

作者

M卡瓦诺¹, M Kaito先生, Y Kozuka公司, H科马达, N野田佳彦, K南坝, M Tsurudome先生, 伊藤, M西尾, 伊藤Y

附属

¹Mie大学医学院微生物系，2-174 Edobashi，Mie，514-8507，日本。kawanom@doc.medic.mie-u.ac.jp

PMID： 11352671
内政部： 2006年10月10日/病毒.2001.0864

摘要

从人类副流感2型病毒（hPIV2）基因组中构建了全长cDNA克隆。首先用表达T7 RNA聚合酶的重组痘苗病毒感染Vero细胞，然后将编码抗原序列的质粒与T7聚合酶启动子控制的聚合酶单位质粒NP、P和L一起转染Vero细胞。随后，转染细胞与新鲜Vero细胞共培养。通过发现导入的基因标签，证明了从cDNA克隆中拯救重组hPIV2（rPIV2）。作为反向遗传学的应用，我们将一个核苷酸改变（UCU到ACU）引入全长hPIV2 cDNA中V基因的RNA编辑位点的下游，并能够从cDNA中获得感染性病毒[rPIV2V（-）]。rPIV2V（-）具有缺陷的V蛋白，其羧基末端（V蛋白特异域）没有独特的富含半胱氨酸的结构域。rPIV2V（-）在CV-1和FL细胞中没有生长。然而，通过向培养基中添加抗干扰素（IFN）-β抗体，可以部分恢复rPIV2V（-）在这些细胞中的复制，这表明rPIV2（-）对IFN高度敏感，并且rPIV2V（-）不会在CV-1和FL细胞中生长，主要是因为它对内源性产生的IFN过敏。这些发现表明，hPIV2的V蛋白特异性结构域与干扰素抵抗有关。另一方面，rPIV2V（-）在Vero细胞中高效复制，Vero细胞被称为干扰素非产生菌。然而，尽管与rPIV2相比，感染rPIV2V（-）的Vero细胞中病毒特异性蛋白及其mRNA的合成增加到48 p.i.，但Vero细胞的rPIV2V-（-）病毒产量比对照rPIV2-低10至100倍。此外，与rPIV2病毒相比，rPIV2V（-）病毒的大小异常。这些结果表明，V蛋白在hPIV2的组装、成熟和形态发生中起着重要作用。

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