Cisplatin induces the proapoptotic conformation of Bak in a deltaMEKK1-dependent manner

doi:10.1128/MCB.21.11.3684-3691.2001

.2001年6月；21(11):3684-91.

doi:10.1128/MCB.211.3684-3691.2001。

顺铂以deltaMEKK1依赖的方式诱导Bak的促凋亡构象

曼迪语¹, K维克托森, M莫林, G Akusjärvi公司, H Eguchi先生, S I Hayashi先生, 马托伊, J汉森, S林德, M C Shoshan先生

附属公司

PMID： 11340162
预防性维修识别码：项目管理委员会86999
内政部： 10.1128/MCB.211.3684-3691.2001

顺铂以deltaMEKK1依赖的方式诱导Bak的促凋亡构象

曼迪语等。分子细胞生物学. 2001年6月.

.2001年6月；21(11):3684-91.

doi:10.1128/MCB.211.3684-3691.2001。

作者

曼迪语¹, K Viktorsson公司, M莫林, G Akusjärvi公司, H Eguchi先生, S I Hayashi先生, 马托伊, J汉森, S林德, M C Shoshan先生

附属

¹瑞典斯德哥尔摩卡罗林斯卡研究所肿瘤病理学系卡罗林斯卡癌症中心镭血红素研究实验室，s-171 76。

PMID： 11340162
预防性维修识别码：项目管理委员会86999
内政部： 10.1128/MCB.211.3684-3691.2001

摘要

在一组四种人类黑色素瘤细胞系中，等毒性剂量的顺铂在凋亡执行阶段之前诱导了Bcl-2家族蛋白Bak的促凋亡构象。因为顺铂诱导的相关Bax蛋白的调节仅见于一个细胞系，因此表明Bak信号具有一定程度的特异性。对Bak活动的上游调控知之甚少。在本研究中，我们检测了由MEKK1激酶片段（DeltaMEKK1）介导的凋亡特异性途径是否参与观察到的Bak调节。我们报告说，MEKK1激酶活性片段（显性阴性MEKK[dnMEKK]）的表达有效地阻断了顺铂诱导的Bak和细胞色素c释放的调节，从而也减少了DEVDase的激活和核碎裂。因此，激酶活性MEKK1片段（显性阳性MEKK）的表达足以在三个细胞系中诱导Bak的调节，并在其中两个细胞系诱导凋亡。dnMEKK没有阻断顺铂诱导的c-Jun N末端激酶（JNK）激活，这与DeltaMEKK1通路的特异促凋亡作用一致。最后，我们发现反义Bak减少Bak的表达可以减少顺铂诱导的乳腺癌细胞系线粒体完整性损失和caspase裂解活性。总之，我们已经确定Bak是促凋亡、JNK非依赖性DeltaMEKK1通路下游的顺铂调节成分。

PubMed免责声明

数字

图1
顺铂诱导Bak而非Bax的调节。如图所示，在制备样本用于Bak或Bax相关IFL的FACS分析之前，用顺铂（20μM，16 h）或staurosporine（1μM，5 h）处理人黑色素瘤224细胞。对照细胞，灰色峰值；处理过的细胞，黑线。（A）顺铂治疗后Bak相关IFL；（B）顺铂治疗后Bax相关IFL；（C）星形孢菌素治疗后Bax相关IFL；（D） Western blot显示对照细胞和顺铂（CISPL）治疗16小时后的Bak蛋白水平。使用微管蛋白（β-TUB）作为内部负荷对照。Ig2a、免疫球蛋白2a。

图2
dnMEKK对顺铂诱导的核碎裂的影响。在有无腺-dnMEKK的情况下，用20μM顺铂处理细胞。顺铂治疗前20 h用DOX诱导dnMEKK表达。（A）顺铂治疗16和24小时后224个细胞的核碎裂；（B） Western blot显示dnMEKK（37 kDa）在相同样本中表达。在未受感染的细胞提取物中也可以看到微弱的内源性条带，因此不是由于渗漏。实验重复进行，结果相似。

图3
dnMEKK阻断细胞色素上游*c（c）*释放而不阻断JNK激活。用20μM顺铂或每毫升15μg BA处理224个细胞，在有无aden-dnMEKK的情况下。药物治疗前20 h用DOX诱导dnMEKK的表达。（A）细胞色素的蛋白质印迹*c（c）*（CYT.C）在加入顺铂（CISPL）后20小时的胞浆提取物中。还用抗线粒体细胞色素氧化酶亚基IV的抗体探测膜，以确保提取物（未显示）不会受到线粒体污染。β-桶。，微管蛋白。（B）在指定的时间点，在细胞提取物（50μg）中测定BA（BET.ACID）诱导的DEVDase活性。结果显示为相对于对照细胞的折叠激活。（C）顺铂诱导的JNK1和-2活化，如在有或无dnMEKK的情况下，在指定的时间点磷酸化所示，通过Western blotting使用磷酸化的JNK1和-2（P-JNK1和-2）特异性抗体进行评估。Tubulin被用作内部负荷控制。

图4
延迟诱导dnMEKK表达阻止核分裂。（A） Western blot显示添加DOX后不同时间点37-kDa dnMEKK表达。（B）通过在指定的时间点添加DOX，诱导224个感染了aden-dnMEKK的细胞表达dnMEKK，这与0h时添加顺铂的时间（20μM）有关。在24h时评估核分裂水平，并与在没有aden-dn MEKK时诱导的分裂相比较。

图5
dnMEKK阻断顺铂诱导的DEVDase活性。在存在或不存在aden-dnMEKK的情况下，用20μM顺铂处理224个细胞，持续指定的时间。顺铂治疗前20 h用DOX诱导dnMEKK表达。收获后，对细胞进行凋亡、DEVDase分析和western blotting。凋亡水平，被视为核分裂，显示在相关的条形图上。填充条，在指定的时间点在细胞提取物中测量对合成底物（Ac-DEVD-AMC）的DEVDase活性。结果显示为相对于对照样品的活性诱导。空条，DNA-PK的切割，通过蛋白质印迹膜上160kDa蛋白水解片段的密度扫描进行评估。结果显示为相对于对照样品的碎片水平。

图6
顺铂诱导的DEVDase和caspase 9/LEHDase活性动力学。224个细胞在没有或存在腺-dnMEKK的情况下，用20μM顺铂处理指定的时间段。顺铂治疗前20 h用DOX诱导dnMEKK表达。空棒，仅顺铂；填充棒，在dnMEKK存在下进行顺铂治疗。（A）对每个重复样品的合成底物Ac-DEVD-AMC上的DEVDase活性进行两次评估。抑制剂DEVD-CHO将所有平行样品中的所有活性降至背景值。结果显示，未经处理（对照[C]）的细胞活性增加了倍。（B）合成底物Ac-LEHD-AMC上的半胱氨酸蛋白酶9/LEH酶活性。抑制剂LEHD-CHO将所有平行样品中的所有活性降至背景值。（C）通过半胱天冬酶9的Western blotting分析细胞提取物（30μg/lane）。35-kDa裂解片段代表活性形式。β-TUB。，微管蛋白；CISPL，顺铂。

图7
dnMEKK阻断顺铂诱导的Bak调节。（A） 224个细胞在没有或存在腺-dnMEKK的情况下用20μM顺铂处理16小时。顺铂治疗前20 h用DOX诱导dnMEKK表达。所示为指示Bak相关IFL的重叠FACS图。灰色峰值，对照细胞；暗线，如图所示，在有或无dnMEKK的情况下进行顺铂治疗。（B） 224和AA细胞系中存在或不存在dnMEKK时顺铂诱导的Bak调制的定量。用LD处理细胞₅₀顺铂（CISPL.）。结果显示，与对照组相比，中位数IFL信号增加了倍。

图8
dpMEKK诱导Bak调节和凋亡。（A）用腺-dpMEKK感染细胞，并在添加DOX后24小时评估Bak相关IFL。为了进行比较，LD诱导的16小时Bak调制₅₀还显示了顺铂（CISPL）的s。结果显示，与对照组相比，中位数IFL信号增加了倍。（B）用adeno-dpMEKK感染细胞，并在添加DOX后24小时评估细胞核碎片。对照细胞中的背景水平有所不同，但不超过6%。

图9
Bax调制的诱导。在添加顺铂（CISPL）后16 h或添加DOX后24 h评估Bax相关IFL，以诱导腺-dpMEKK感染细胞中的dpMEKK表达。还显示了staurosporine（STSN；1μM，5 h）对224、AA和FM55细胞Bax调节的影响。

**图10**
减少表达反义Bak的细胞的凋亡反应。用20μM顺铂处理父母MCF-7和两个稳定表达反义Bak的亚克隆21小时。（A）根据制造商的指示，通过ELISA定量细胞裂解液中细胞角蛋白18的Caspase-片断来评估Caspase活性（凋亡ELISA试剂盒；Peviva AB）。结果显示为抗体M30特异性识别的片段水平的倍数增加。（B）在重复样品中测定线粒体跨膜电位，作为四甲基罗丹明乙酯（TMRE；Molecular Probes Inc.）的保留物，这是一种阳离子、亲油性荧光染料，积聚在带负电的线粒体基质中。线粒体去极化，如凋亡期间所见，定量为通过流式细胞术评估的TMRE荧光信号的损失。结果显示，线粒体去极化的细胞比例增加了倍，即在对照组中显示TMRE信号中位数小于中位数信号的5%的细胞。AS#8和AS#9是稳定表达反义Bak的克隆。

请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

干扰素α诱导的U266细胞凋亡与促凋亡Bcl-2家族成员Bak和Bax的激活有关。
Panaretakis T、Pokrovskaja K、Shoshan MC、Grandér D。 Panaretakis T等人。致癌物。2003年7月17日；22(29):4543-56. doi:10.1038/sj.onc.1206503。致癌物。2003 PMID：12881711
c-Myc通过作用p38信号级联中凋亡信号调节激酶1（Ask1）上游，增强线粒体凋亡途径。
Desbiens KM、Deschesnes RG、Labrie MM、Desfossés Y、Lambert H、Landry J、Bellmann K。 Desbiens KM等人。《生物化学杂志》2003年6月1日；372（第2部分）：631-41。doi:10.1042/BJ20021565。《生物化学杂志》，2003年。 PMID：12646044 免费PMC文章。
非小细胞肺癌细胞系中对电离辐射而非顺铂反应的缺陷性应激激酶和Bak活化。
Viktorsson K、Ekedahl J、Lindebro MC、Lewensohn R、Zhivotovsky B、Linder S、Shoshan MC。 Viktorsson K等人。实验细胞研究，2003年10月1日；289(2):256-64. doi:10.1016/s0014-4827（03）00264-7。实验细胞研究2003。 PMID：14499626
GADD153和Bak的诱导：非那替尼诱导神经母细胞瘤凋亡的新分子靶点。
Lovat PE、Oliverio S、Corazzari M、Ranalli M、Pearson AD、Melino G、Piacentini M、Redfern CP。 Lovat PE等人。癌症快报。2003年7月18日；197(1-2):157-63. doi:10.1016/s0304-3835（03）00098-3。癌症快报。2003 PMID：12880976 审查。
组蛋白的秘密生命。
Gillespie DA，Vousden KH。 Gillespie DA等人。单元格。2003年9月19日；114(6):655-6. doi:10.1016/s0092-8674（03）00723-2。单元格。2003 PMID：14505563 审查。

查看所有类似文章

引用人

Caspase-2是急性髓系白血病中对吉图单抗奥佐米辛反应的凋亡信号介导物。
Hárg P、Olsson M、Forsberg J、Lindberg ML、Stenerlöw B、Zong D、Kanter L、Lewensohn R、Viktorsson K、Zhivotovsky B、Stenke L。 Hárg P等人。细胞死亡发现。2022年6月11日；8(1):284. doi:10.1038/s41420-022-01071-9。细胞死亡发现。2022 PMID：35690610 免费PMC文章。
茶黄素对B16F10黑色素瘤细胞的抗增殖、促凋亡、抗迁移和肿瘤抑制作用及多向性机制。
张磊，孟S，闫B，陈J，周磊，珊L，王毅。张磊等。 Onco针对Ther。2021年2月25日；14:1291-1304. doi:10.2147/OTT。S286350.电子收款2021。 Onco针对Ther。2021 PMID：33658796 免费PMC文章。
茶黄素通过P53和JNK相关机制诱导A375人黑色素瘤细胞凋亡并抑制异种斑马鱼肿瘤生长。
张磊，闫波，孟S，周磊，徐毅，杜伟，珊磊。张磊等。前沿药理学。2020年8月31日；11:1317. doi:10.3389/fphar.2020.01317。eCollection 2020。前沿药理学。2020 PMID：32982737 免费PMC文章。
二氢青蒿素是大肠癌细胞中的低氧抗癌药物。
Ontikatze T、Rudner J、Handrick R、Belka C、Jendrossek V。 Ontikatze T等人。前Oncol。2014年5月19日；4:116. doi:10.3389/fonc.2014.00116。2014年电子收集。前Oncol。2014 PMID：24904829 免费PMC文章。
MAP3K1：癌症的基因组改变和促进细胞生存或凋亡的功能。
Pham TT、Angus SP、Johnson GL。 Pham TT等人。基因癌症。2013年11月；4(11-12):419-26. doi:10.1177/1947601913513950。基因癌症。2013 PMID：24386504 免费PMC文章。

查看所有“被引用”文章

工具书类

1. Cardone M H、Salvesen G S、Widmann C、Johnson G、Frisch S。失巢凋亡的调节：MEKK-1活化需要半胱氨酸蛋白酶的切割。单元格。1997;90:315–323.-公共医学
1. Caulin C，Salvesen G S，Oshima R G.上皮细胞凋亡过程中角蛋白18的半胱氨酸蛋白酶裂解和中间丝的重组。细胞生物学杂志。1997;138:1379–1394.-项目管理咨询公司-公共医学
1. Davis R J.MAP激酶JNK组的信号转导。单元格。2000;103:239–252.-公共医学
1. Deak J，Cross J V，Lewis M，Qian Y，Parrott L A.Fas诱导的蛋白水解激活和应激信号激酶MEKK1的细胞内再分布。美国国家科学院院刊1998；95:5595–5600.-项目管理咨询公司-公共医学
1. Desagher S、Osen-Sand A、Nichols A、Eskes R、Montessuit S、Lauper S、Maundrell K、Antonsson B、Martinou J-C。Bid诱导的Bax构象变化负责细胞凋亡期间线粒体细胞色素C的释放。细胞生物学杂志。1999;144:891–901.-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

行动

MeSH术语

行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动

物质

行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动

LinkOut-更多资源

[1] Cardone M H、Salvesen G S、Widmann C、Johnson G、Frisch S。失巢凋亡的调节：MEKK-1活化需要半胱氨酸蛋白酶的切割。单元格。1997;90:315–323.-公共医学

[2] Cardone M H、Salvesen G S、Widmann C、Johnson G、Frisch S。失巢凋亡的调节：MEKK-1活化需要半胱氨酸蛋白酶的切割。单元格。1997;90:315–323.-公共医学

[3] Caulin C，Salvesen G S，Oshima R G.上皮细胞凋亡过程中角蛋白18的半胱氨酸蛋白酶裂解和中间丝的重组。细胞生物学杂志。1997;138:1379–1394.-项目管理咨询公司-公共医学

[4] Caulin C，Salvesen G S，Oshima R G.上皮细胞凋亡过程中角蛋白18的半胱氨酸蛋白酶裂解和中间丝的重组。细胞生物学杂志。1997;138:1379–1394.-项目管理咨询公司-公共医学

[5] Davis R J.MAP激酶JNK组的信号转导。单元格。2000;103:239–252.-公共医学

[6] Davis R J.MAP激酶JNK组的信号转导。单元格。2000;103:239–252.-公共医学

[7] Deak J，Cross J V，Lewis M，Qian Y，Parrott L A.Fas诱导的蛋白水解激活和应激信号激酶MEKK1的细胞内再分布。美国国家科学院院刊1998；95:5595–5600.-项目管理咨询公司-公共医学

[8] Deak J，Cross J V，Lewis M，Qian Y，Parrott L A.Fas诱导的蛋白水解激活和应激信号激酶MEKK1的细胞内再分布。美国国家科学院院刊1998；95:5595–5600.-项目管理咨询公司-公共医学

[9] Desagher S、Osen-Sand A、Nichols A、Eskes R、Montessuit S、Lauper S、Maundrell K、Antonsson B、Martinou J-C。Bid诱导的Bax构象变化负责细胞凋亡期间线粒体细胞色素C的释放。细胞生物学杂志。1999;144:891–901.-项目管理咨询公司-公共医学

[10] Desagher S、Osen-Sand A、Nichols A、Eskes R、Montessuit S、Lauper S、Maundrell K、Antonsson B、Martinou J-C。Bid诱导的Bax构象变化负责细胞凋亡期间线粒体细胞色素C的释放。细胞生物学杂志。1999;144:891–901.-项目管理咨询公司-公共医学

将引文保存到文件

电子邮件引文

添加到集合

添加到我的书目

您保存的搜索

为外部引文管理软件创建文件

您的RSS源

顺铂以deltaMEKK1依赖的方式诱导Bak的促凋亡构象

附属

顺铂以deltaMEKK1依赖的方式诱导Bak的促凋亡构象

作者

附属

摘要

数字

类似文章

引用人

工具书类

出版物类型

MeSH术语

物质

LinkOut-更多资源

全文源

其他文献来源

研究材料

其他

摘要

数字

类似文章

引用人

工具书类

出版物类型

MeSH术语

物质

相关信息

LinkOut-更多资源

全文源

其他文献来源

研究材料

其他