Recombinant bovine/human parainfluenza virus type 3 (B/HPIV3) expressing the respiratory syncytial virus (RSV) G and F proteins can be used to achieve simultaneous mucosal immunization against RSV and HPIV3

doi:10.1128/JVI.75.10.4594-4603.2001

.2001年5月；75(10):4594-603.

doi:10.1128/JVI.75.10.4594-4603.2001。

表达呼吸道合胞病毒（RSV）G和F蛋白的重组牛/人副流感病毒3型（B/HPIV3）可用于实现对RSV和HPIV3的同时黏膜免疫

A C施密特¹, J M麦考利夫, B R墨菲, P L柯林斯

附属公司

PMID： 11312329
预防性维修识别码：项目经理114212
DOI（操作界面）： 10.1128/JVI.75.10.4594-4603.2001年

表达呼吸道合胞病毒（RSV）G和F蛋白的重组牛/人副流感病毒3型（B/HPIV3）可用于实现对RSV和HPIV3的同时黏膜免疫

A C施密特等。 J维罗尔. 2001年5月.

.2001年5月；75(10):4594-603.

doi:10.1128/JVI.75.10.4594-4603.2001。

作者

A C施密特¹, J M麦考利夫, B R墨菲, P L柯林斯

附属

¹美国马里兰州贝塞斯达国立卫生研究院国家过敏和传染病研究所传染病实验室，邮编：20892。aschmidt@niaid.nih.gov

PMID： 11312329
预防性维修识别码：项目经理114212
DOI（操作界面）： 10.1128/JVI.75.10.4594-4603.2001年

摘要

重组牛/人副流感病毒3型（rB/HPIV3）是一种重组牛PIV3（rBPIV3），其中F和HN基因被其HPIV3对应物替换，用于表达呼吸道合胞病毒（RSV）的主要保护性抗原，以创建一种针对RSV和HPIV3的双价粘膜疫苗。灵长类BPIV3主干的宿主范围限制提供了rB/HPIV3的衰减。将RSV G和F开放阅读框（ORF）置于PIV3转录信号的控制下，分别插入核衣壳蛋白基因前启动子近端的rB/HPIV3基因组。表达RSV G ORF（rB/HPIV3-G1）的重组PIV3在体外复制中不受限制，而表达RSV F ORF的病毒（rB/HPIV3-F1）比其亲本rB/HPIV3受到八倍的限制。两种病毒都在仓鼠的呼吸道中有效复制，并且每种病毒都诱导了类似于RSV感染诱导的RSV血清抗体滴度和类似于HPIV3感染诱导的抗HPIV3滴度。用rB/HPIV3-G1、rB/HPIV3-F1或这两种病毒的组合免疫仓鼠，28天后对RSV或HPIV3的攻击产生了高水平的耐药性。这些结果描述了一种疫苗策略，该策略避免了与RSV减毒活疫苗相关的技术挑战，针对儿童呼吸道疾病的两种主要病毒因子，提供了一种二价疫苗，其减毒表型基于BPIV3广泛的宿主范围序列差异。

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数字

图1
插入RSV G或F作为额外的启动子近端基因。通过引入一种独特的*Blp公司*N ORF起始密码子之前N基因的非翻译区域中的I位点（粗体斜体；原始序列显示在顶部）。PCR突变用于在G和F ORF停止信号的下游立即添加PIV3基因末端（GE）、基因间区域和基因启动（GS）信号，以及*Blp公司*I站点被添加到插入的两侧。序列AAGTAAGAAAAA作为基因结束信号，AGGATTAAAG作为基因启动信号。与仙台病毒（56）类似，存在于N基因非翻译区的病毒启动子元件由三个盒装六聚体表示，G残基以粗体显示。

图2
猴LLC-MK2细胞中rB/HPIV3-G1、rB/HPIV3-F1及其亲代病毒的多周期复制。用rB/HPIV3-G1、rB/HPIV3-F1、rB/HPIV3、rBPIV3、BPIV3和HPIV3以0.01的MOI感染LLC-MK2细胞的三硅酸盐培养物。每隔24小时取一等分的细胞培养液，通过连续稀释法测定病毒滴度。标题显示为平均对数₁₀TCID公司₅₀/ml三份样品。本试验的检测限为10^1.45TCID公司₅₀/毫升。

图3
rB/HPIV3-G1和rB/HPIV3-F1分别表达RSV G和F糖蛋白。用所示病毒的系列稀释液感染HEp-2细胞，并在甲基纤维素下培养5天。固定微孔，并使用所示抗体在免疫过氧化物酶分析中对病毒斑块进行染色：RSV G-特异性单克隆抗体1187和131-2g；RSV F特异性单克隆抗体1129、1269和1243（4）；和HPIV3 HN特异性MAb 454/11（11）。

图4
Vero细胞单层中的rB/HPIV3-G1和rB/HPIV3-F1斑块形态。Vero细胞单层被连续稀释的rB/HPIV3-G1或rB/HPIV3-F1感染，起始MOI为0.01。固定微孔，并使用所示抗体在免疫过氧化物酶分析中对病毒斑块进行染色：RSV G-特异性单克隆抗体1187和131-2g以及RSV F-特异性单克隆抗体1129、1269和1243（4）。rB/HPIV3-G1诱导圆形细胞的实体斑块，类似于rB/HPIV3诱导的斑块。rB/HPIV3-F1诱导巨大合胞体，类似于RSV诱导的斑块。

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