Rabies virus-based vectors expressing human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) envelope protein induce a strong, cross-reactive cytotoxic T-lymphocyte response against envelope proteins from different HIV-1 isolates

doi:10.1128/JVI.75.9.4430-4434.2001

.2001年5月；75(9):4430-4.

doi:10.128/JVI.75.9.4430-4434.2001。

表达人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）包膜蛋白的基于狂犬病病毒的载体对不同HIV-1分离株的包膜蛋白诱导强烈的交叉反应性细胞毒性T淋巴细胞反应

J P McGettigan公司¹, H D福利, 我是贝尔亚科夫, J A Berzofsky（J A贝佐夫斯基）, R J波美兰茨, M J施奈尔

附属机构

PMID： 11287595
预防性维修识别码：项目经理114191
DOI（操作界面）： 10.1128/JVI.75.9.4430-4434.2001

表达人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）包膜蛋白的狂犬病病毒载体对不同HIV-1分离株的包膜蛋白诱导强烈的交叉反应性细胞毒性T淋巴细胞反应

J P McGettigan公司等。 J维罗尔. 2001年5月.

.2001年5月；75(9):4430-4.

doi:10.1128/JVI.75.9.4430-4434.2001。

作者

J P McGettigan公司¹, H D福利, 我是贝尔亚科夫, J A Berzofsky（J A贝佐夫斯基）, R J波美兰茨, M J Schnell先生

附属

¹美国宾夕法尼亚州费城托马斯杰斐逊大学杰斐逊医学院人类病毒学中心Dorrance H.Hamilton实验室，邮编：19107。

PMID： 11287595
预防性维修识别码：项目经理114191
DOI（操作界面）： 10.1128/JVI.75.9.4430-4434.2001

摘要

新型病毒载体能够诱导强烈和持久的免疫应答，可能需要作为人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）感染的有效疫苗。我们之前对表达实验室适应型HIV-1毒株（NL4-3）和主要HIV-1分离物（89.6）的HIV-1包膜蛋白的复制能力疫苗株狂犬病病毒（RV）进行的实验表明，基于RV的载体非常适合B细胞启动。在这里，我们报告了重组RV诱导对HIV-1 gp160的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）反应。我们的结果表明，用表达HIV-1 gp160的RV单次接种小鼠，可诱导对HIV-1包膜蛋白特异性的稳定持久记忆CTL反应。此外，来自免疫小鼠的CTL不仅限于同源HIV-1包膜蛋白，而且能够交叉杀伤来自异源HIV-1株表达HIV-1 gp160的靶细胞。这些研究进一步表明，基于RV的载体有望引发对HIV-1的持续免疫反应，并有望成为有效的抗HIV-1疫苗。

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数字

图1
来自HIV-1 gp160免疫小鼠的CTL诱导持久的HIV-1 gp160特异性CTL。每组3只6-8周龄雌性BALB/c小鼠（Harlan Sprague-Dawley）经腹腔接种2×10⁷表达HIV-1的重组RV的FFU_NL4–3型包膜蛋白。在单次接种后105（A）至135（B）天，无菌取出并合并三只小鼠的脾脏，制备单细胞悬液。用ACK裂解缓冲液（BioWhittaker）裂解红细胞，并在含有10%胎牛血清的RPMI-10培养基中洗涤两次。脾细胞分为效应细胞和刺激细胞。通过感染表达HIV-1包膜蛋白的痘苗病毒制备刺激细胞_NL4–3型（vCB41）(▪) 在1的MOI下培养2小时。细胞清洗一次以去除多余的病毒，并培养16小时。培养后，使用最终浓度为5μg/ml的补骨脂素灭活痘苗病毒10分钟，用长波紫外线处理4分钟，然后清洗两次。以3:1的比例将刺激细胞添加回效应细胞群，并添加10%的T-STIM（协同生物医学产品）作为白细胞介素-2的来源。培养CTL的细胞溶解活性通过4-h试验测定⁵¹体外刺激7天后，Cr标记的P815靶细胞。通过感染表达HIV-1的痘苗病毒制备靶细胞_NL4–3型gp160在MOI为10时持续1小时。清洗细胞以去除多余的病毒并孵育16 h。为了测量背景，用表达HIV-1 Gag（vP1287）（○）或野生型痘苗病毒（vP1170）的痘苗病毒感染目标细胞。清洗一次目标细胞，用100μCi⁵¹Cr处理1h，洗涤两次，并以不同E/T比加入效应细胞4h⁵¹Cr释放量计算为100×[（实验释放−自发释放）/（最大释放−自然释放）]。通过添加5%Triton X-100溶解的细胞上清液测定最大释放量。在不添加效应细胞的情况下，从培养的靶细胞中测定自发释放。

图2
来自HIV-1 gp160免疫小鼠的CTL交叉杀伤表达异源HIV-1包膜蛋白的靶细胞。每组6只6-8周龄雌性BALB/c小鼠经腹腔接种2×10⁷表达来自菌株NL4-3（A）或89.6（B）HIV-1包膜蛋白的重组RV的FFU。在单次接种后3周和4周，无菌取出脾脏，用表达同源HIV-1包膜蛋白的痘苗病毒在体外刺激脾细胞，如图1图例所示。通过感染表达NL4–3株（vCB41）HIV-1包膜蛋白的痘苗病毒制备靶细胞(▪), 89.6（vBD3）（●）、JR-FL（vCB28）（▴）或Ba-L（vBB43）(♦). 为了测量背景，用表达HIV-1 Gag（vP1287）（○）或野生型痘苗病毒（vP1170）（¨）的痘苗病毒感染目标细胞。按照图1图例所述完成铬释放分析。所示结果来自两个不同的独立实验。误差条显示标准偏差。

图3
细胞裂解活性由CD8介导⁺T细胞.每组3只6-8周龄雌性BALB/c小鼠经腹腔接种2×10⁷表达NL4-3株HIV-1包膜蛋白的重组RV的FFU。在单次接种后18周，无菌地去除脾脏，并用表达HIV-1的痘苗病毒体外刺激脾细胞_NL4–3型包膜蛋白如图1图例所示。体外刺激后7天，CD8⁺T细胞从细胞培养物中被耗尽（CD8⁻)或浓缩（CD8⁺)使用制造商描述的Dynabeads鼠标CD8（Lyt2）。按照图1图例中的描述，在培养基耗尽（CD8）的情况下完成铬释放分析⁻)或浓缩（CD8⁺)CD8 T细胞或（CD8⁺CD8（CD8）⁻)未经处理的培养物。通过感染表达NL4-3（vCB41）HIV-1包膜蛋白的痘苗病毒制备靶细胞。为了测量背景，用表达HIV-1 Gag（vP1287）的痘苗病毒感染靶细胞。背景水平等于或低于6%的特异性溶解。E/T比为25:1（灰色条）和12.5:1（黑色条）。

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