跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

政府意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2001年4月10日；98（8）:4492-7。
doi:10.1073/pnas.081076898。 Epub 2001年3月27日。

哺乳动物mad2和bub1/bubR1识别不同的纺锤体附着和动粒张力检查点

D A斯科菲亚斯 1, P R安德烈森, F B拉克鲁瓦, 威尔逊, R L马戈利斯
附属公司

哺乳动物mad2和bub1/bubR1识别不同的纺锤体附着和动粒张力检查点

D A斯科菲亚斯等人。 美国国家科学院程序. .

摘要

中期检查点控制有丝分裂期间染色体排列的异常，并防止进展到后期，直到获得正确的排列。许多蛋白质，包括mad2、bub1和bubR1，都与哺乳动物细胞的中期检查点控制有关。在各种系统中，已经显示了中期检查点，用于读取动粒处纺锤张力或微管附着的损失。典型的特征是，HeLa细胞在中期被低水平的微管抑制剂抑制，留下完整的纺锤体和中期板。这里我们表明，纳米长春碱诱导的阻滞与动粒张力损失相关，作为响应，检查点蛋白bub1和bubR1被招募到动粒，而mad2则没有。mad2仍然有能力作出反应，并以较高的药物剂量招募，这会破坏纺锤体与动粒的联系。此外，尽管mad2与cdc20形成复合物，但它与bub1或bubR1不相关。我们得出结论，哺乳动物的bub1/bubR1和mad2分别作为感受张力和附着的不同路径的元件。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
低浓度长春碱处理HeLa细胞抑制微管动力学同时保持双极有丝分裂纺锤体和附着的动粒。(A类)双重标签着丝粒的免疫荧光显微镜检查（绿色；用CREST变异硬皮病人类自身免疫血清）和抗管蛋白（红色）证明6.7 nM VBL不会干扰双极轴与未经处理的对照组相比，与动粒相关中期细胞。相比之下，0.5μM VBL诱导完全拆卸有丝分裂纺锤体。（巴=10μm）嵌入式显示代表用于测量值。使用以下方法进行点对点测量科摩斯软件。动粒对由它们的非常接近，出现在同一焦平面上，以及中期，与纺锤长轴对齐。仔细斟酌的距离插入显示的动粒为：对照，2.04微米；L-VBL，1.24μm；H-VBL，1.16μm。(B类)VBL公司（6.7 nM）抑制动粒处的纺锤张力，减少姐妹动粒与未处理动粒之间的距离控制中期（从1.95±0.28μm到1.15±0.2μm），屈服值与0.5μm VBL处理的屈服值相当无纺锤形细胞（1.1±0.23μm）。(C类)mad2、bub1和bubR1的整个细胞水平，由免疫印迹，在纺锤形细胞中保持恒定动力学被抑制（6.7 nM VBL）或主轴被抑制分解（0.5μM VBL或1.7μM诺卡唑）。细胞周期蛋白B印迹是证实有丝分裂状态。β-微管蛋白印迹证实所有提取物的等量装载。
图2
图2
bub1和bubR1，但不是mad2，对缺少主轴张力作出响应通过与动粒结合。(A类)mad2缺席附着微管且对损失不敏感的动粒通过增加6.7 nM VBL 20分钟的张力。相比之下，mad2当依恋被添加0.5μM VBL。在控制中期细胞的动粒，但在动粒处重新结合当张力被添加6.7抑制时，中期阵列nM VBL或微管附着通过增加0.5而消除μM VBL。在几个独立实验中结果一致和（针对bub1）使用两种不同的抗体（数据未显示）。对于每个抗原，所有图像都用共焦显微镜收集通过使用成像控制中期建立的恒定设置。（巴=5μm）(B类)抗原水平为利用光子计数模式对不同条件进行量化共焦显微镜。(左侧)显示的图像是在相同机器设置下以光子计数模式采集每个抗原。(赖特)每个不同条件下，每个至少计数300个动粒数据集。标准偏差如所示。
图3
图3
mad2、bub1、bubR1和cdc20之间的关联。(A类)Western blot显示既没有bub1也没有bubR1与有丝分裂细胞提取物中的mad2诺卡唑堵塞）。Cdc20与mad2和弱地与bubR1结合，但不与bub1结合。(B类)蛋白质印迹显示mad2在细胞提取物中完全可溶。上清液（S）和微丸（P）是在等效初始体积的基础上装载的。
图4
图4
VLB处理的HeLa对抗mad2微注射的反应。免疫荧光显微照片显示微量注射GFP或抗mad2抗体。(A类)预处理细胞低VBL（L-VBL）保持中期形态20分钟微量注射抗mad2抗体。(B类)进行GFP微量注射作为未经处理的中期细胞的阳性对照。所示为中期停留30和60分钟的代表性细胞，分别在微量注射后。后期（后期为75min），细胞进入有丝分裂后期并退出有丝分裂。(C类)未治疗中期微量注射抗mad2细胞。与GFP对照组相比，进展迅速通过后期和分裂。此处显示代表性单元格30微量注射后min，分别在后期和末期。后期细胞都显示出染色体桥接的证据（箭头），表明过早进入后期（这两幅30分钟的图像都经过了增强，以使桥接清晰可见）。GFP公司或抗mad2标签能明确识别成功进行微注射。PI，碘化丙啶染色评估显微注射后的染色体状态。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Li R，Murray A W.Cell。1991;66:519–531.-公共医学
    1. Hoyt MA、Totis L、Roberts B T.Cell。1991;66:507–517.-公共医学
    1. Amon A.Curr Opin Genet Dev.1999年；9:69–75.-公共医学
    1. Li Y，Benezra R.科学。1996;274:246–248.-公共医学
    1. Chen R H，Waters J C，Salmon E D，Murray A W.科学。1996;274:242–246.-公共医学

出版物类型

LinkOut-更多资源