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.2001年3月15日;20(6):1383-93.
doi:10.1093/emboj/20.6.1383。

N-myc增强核糖体生物发生和蛋白质合成中大量基因的表达

附属公司

N-myc增强了在核糖体生物生成和蛋白质合成中起作用的大量基因的表达

K Boon公司等。 欧洲工商管理硕士J. .

摘要

myc癌基因在人类肿瘤中经常被激活,但对这些转录因子的靶基因和下游细胞途径还没有全面的认识。我们应用基因表达序列分析(SAGE)来确定神经母细胞瘤中N-myc的靶点。对N-myc转染和对照神经母细胞瘤细胞SAGE文库中42000 mRNA转录标签的分析显示114个上调基因。这些基因中的大多数在核糖体组装和活性中起作用。Northern印迹分析证实了所有测试转录物的上调。N-myc表达后4小时内诱导完成。大多数核糖体蛋白以及控制rRNA成熟的基因都是诱导的。细胞rRNA含量被诱导45%。SAGE文库和northern印迹分析证实,其中许多基因在N-myc扩增的神经母细胞瘤中上调。由于N-myc可以在功能上取代c-myc,我们分析了N-myc靶点是否也由c-myc诱导。在c-myc转染的黑色素瘤细胞系中,大约40%的N-myc靶点上调。这些数据表明,myc基因是蛋白质合成机制的主要调节器。

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数字

无
图1。N-myc下游靶基因的Northern blot分析。从指数增长的SHEP-2和SHEP-21N细胞中装载等量的总RNA。将Northern印迹与19个指示N-myc靶点的探针杂交。溴化乙锭染色检测RNA定量;图中显示了28S波段。
无
图2。确定为N-myc靶点的56个核糖体蛋白基因的诱导水平(P(P)<0.01)。(A类)N-myc在SHEP-21N细胞中的折叠诱导作为SHEP-2中基本表达水平的函数。x个-轴,每10000个标记归一化的SHEP-2细胞的基本表达水平;-SHEP-21N细胞的轴、折叠诱导。(B类)N中相同56个核糖体蛋白基因的增加-myc公司-扩增的神经母细胞瘤N159与N中基本表达水平的关系-myc公司单拷贝神经母细胞瘤N52。x个-轴,N52中的表达水平每10000个标记归一化;-轴,N159相对于N52的褶皱增加。
无
图3。N的时间进程分析-myc公司SHEP-21N细胞中下游靶基因的诱导。用10 ng/ml四环素处理SHEP-21N细胞24小时,洗涤并在不使用四环素的情况下生长36小时。在四环素处理0、8和24小时时收集细胞。在去除抗生素后的1、2、4、8、10、12、24和36小时采集后续样品。(A类)指定时间点总RNA的Northern blot分析。(B类)在指定时间点对N-myc蛋白进行Western blot分析。通过10%SDS-聚丙烯酰胺凝胶对时间过程实验的10µg等分总蛋白样品进行分馏,在Immobilon膜上进行印迹,并用单克隆抗N-myc抗体进行探测。
无
图4。SHEP-2和SHEP-21N细胞的N-myc、核仁蛋白、核磷蛋白、翻译延伸因子EEF1γ和EEF1β的表达以及总RNA含量。(A类)蛋白质印迹分析。通过丙烯酰胺凝胶分离细胞总提取物(10µg),用抗N-myc和核磷蛋白的单克隆抗体以及抗核仁蛋白、EEF1γ和EEF1β的多克隆抗体进行印迹和探测。用四环素处理SHEP-21N细胞0–8天(泳道2–8),随后在不使用四环素的情况下培养1或7天(泳道9和10)。考马斯蓝染色显示为装载控制。(B类)SHEP-2和SHEP-21N细胞总RNA含量。从10个样本中的10个样本分离出RNA6并进行分光光度分析。错误栏显示SD。
无
图5。神经母细胞瘤细胞系和肿瘤总RNA的Northern blot分析。将过滤器与指示的探针杂交。溴化乙锭染色检测RNA定量;图中显示了28S波段。(A类)21个神经母细胞瘤细胞系的小组。(B类)16例新鲜肿瘤。1-9巷的肿瘤被N-myc放大。
无
图6。c-myc转染黑色素瘤细胞系中N-myc靶基因诱导的Northern blot分析。克隆3是IGR39D黑色素瘤细胞系的c-myc转染克隆。加载等量的IGR39D和克隆3总RNA。过滤器与所示探针杂交。

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引用人

工具书类

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