Caveolin-2 is targeted to lipid droplets, a new "membrane domain" in the cell

doi:10.1083/jcb.152.5.1079

.2001年3月5日；152(5):1079-85.

doi:10.1083/jcb.152.5.1079。

Caveolin-2靶向细胞中新的“膜域”脂滴

T藤本¹, H Kogo公司, K石黑浩, K陶奇, R野村

附属公司

PMID： 11238462
预防性维修识别码：项目经理2198803
内政部： 10.1083/jcb.152.5.1079

Caveolin-2靶向细胞中新的“膜域”脂滴

T藤本等。 J细胞生物学. 2001.

.2001年3月5日；152(5):1079-85.

doi:10.1083/jcb.152.5.1079。

作者

T藤本¹, H Kogo公司, K石黑浩, K陶奇, R野村

附属

¹日本名古屋466-8550名古屋大学医学研究生院解剖与分子细胞生物学系。tfujimot@med.nagoya-u.ac.jp

PMID： 11238462
预防性维修识别码：项目经理2198803
内政部： 10.1083/jcb.152.5.1079

摘要

Caveolin-1和-2在非肌肉细胞中构成小窝的框架。在本研究中，我们通过免疫荧光和免疫电子显微镜以及亚细胞分离表明，小窝蛋白-2，尤其是其β亚型，靶向脂滴（LD）的表面。布雷费尔丁A处理诱导LD中小窝蛋白-2和小窝蛋白-1的进一步积累。对小鼠caveolin-2缺失突变体的分析表明，中心疏水结构域（残基87-119）、NH（2）-末端（残基70-86）和COOH末端（残基120-150）亲水结构域都是LD定位所必需的。NH（2）-和COOH末端结构域似乎分别与膜结合和从内质网退出有关，这意味着小窝蛋白-2被合成并作为膜蛋白运输到LD。结合最近发现LD含有非酯化胆固醇和raft蛋白，结果表明LD表面可能起到膜结构域的作用。这也表明LD与小窝蛋白介导的脂质分子贩运有关。

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数字

图1
HepG2稳定表达小窝蛋白-2β（a）和小窝蛋白-1（b）的共焦显微镜观察。Caveolins（绿色），LD染色苏丹红III（红色）。小窝蛋白-2在LD周围不连续出现，而小窝蛋白-1沿着细胞边缘出现，与LD无关。（c） FRTL-5瞬时转染全长caveolin-2 cDNA并与OA/BSA培养2 d。在LD（红色）周围观察到caveolin-2（绿色）。用小窝蛋白-2β（d）或全长小窝蛋白2（e）cDNA稳定转染HepG2后，标记小窝蛋白-2（绿色）和GM130（红色）。与GM130重叠的小窝蛋白-2β标记很少（d），而细胞中主要亚型小窝蛋白2α主要定位于高尔基体（e）。箭头表示LD周围的标签。棒材，10μm。

图2
（a和b）表达小窝蛋白-2β的HepG2的免疫电子显微镜（克隆a-8）。条形，500 nm。（a）超薄冷冻切片。在LD边缘观察到标记小窝蛋白-2的金颗粒，呈小簇状（箭头）；LD的内容似乎是空白的。（b）冻结断裂复制副本。LD的P面上观察到小窝蛋白-2的金颗粒呈簇状（箭头），呈类离子形态。LD（E）的E面没有标记。（c） HepG2克隆A-8亚细胞组分的蛋白质印迹。图表显示了各部分的蛋白质含量。前两个组分（#1和#2）几乎不含蛋白质，但显示小窝蛋白-2和嗜脂蛋白的阳性信号。GM130、66-kD蛋白质和钠⁺/K（K）⁺-ATP酶（高尔基体、ER和质膜标记物）仅存在于底部组分中。

图3
（a） NRK表达EGFP–小窝蛋白-2以及内源性小窝蛋白-1和-2，与OA/BSA培养。LD（红色）周围可见EGFP-caveolin-2（绿色）（箭头）。（b和c）HepG2稳定表达小窝蛋白-1和-2（克隆6）。Caveolin-1（红色）和-2（绿色）在质膜（b）中显示共定位，在一些细胞中仅在LD（红色）周围观察到Caveolin-2（绿色）（箭头）（c）。分别用甲醇和Triton X-100处理b和c细胞，以显示质膜（b）和细胞内（c）标记。棒材，10μm。（d）从HepG2克隆6。LD组分（#1和#2）中只检测到caveolin-2，而没有检测到cavelolin-1。

图3
（a） NRK表达EGFP–小窝蛋白-2以及内源性小窝蛋白-1和-2，与OA/BSA培养。LD（红色）周围可见EGFP-caveolin-2（绿色）（箭头）。（b和c）HepG2稳定表达小窝蛋白-1和-2（克隆6）。Caveolin-1（红色）和-2（绿色）在质膜中显示共定位（b），并且在一些细胞中仅在LD（红色）周围观察到Caveolin-2（绿色）（箭头）（c）。分别用甲醇和Triton X-100处理b和c细胞，以显示质膜（b）和细胞内（c）标记。棒材，10μm。（d） HepG2克隆6亚细胞组分的蛋白质印迹。LD组分（#1和#2）中只检测到caveolin-2，而没有检测到cavelolin-1。

图4
（a）用BFA处理稳定转染全长小窝蛋白-2 cDNA的HepG2 2小时。在大多数细胞中，小窝蛋白2（绿色）局限于LD（红色）（箭头）。（b和c）用BFA处理人类成纤维细胞16小时。在LD（红色）（箭头）周围观察到小窝蛋白-2（b）和小窝蛋白-1（c）（绿色）。（d） HepG2稳定转染全长小窝蛋白-1 cDNA。在BFA治疗7小时后，偶尔在LD（红色）周围的细胞中可以看到小窝蛋白-1（绿色）（箭头所示）。棒材，10μm。

图5
（a）小窝蛋白-2突变体及其在HepG2瞬时表达中的分布图。（b–e）通过抗小窝蛋白-2标记（b、d和e）或EGFP（c）（绿色）观察突变体的分布，并与LD、Golgi或ER标记（红色）进行比较。箭头标记明显围绕LD的标签。棒材，10μm。（b）单个氨基酸替换物用于检查α和β亚型之间的差异。即使当第二个翻译起始位点蛋氨酸-14被亮氨酸（M14/L）取代，或假定的肉豆蔻酰化位点甘氨酸-2被丙氨酸（G2/a）取代时，其分布与小窝蛋白-2α的分布并无不同。（c） NH公司₂-末端缺失突变体融合到EGFP的COOH末端。多达69个残基（70-162）的缺失并不影响LD的定位，但进一步截断（71-162）会导致细胞溶质分布。（d） COOH末端缺失突变体。对于α和β亚型，当序列保持到第150个残基时，其分布没有改变。随着更多氨基酸被删除，LD和高尔基体中的定位变得不那么明显，网络状标记增多。后一种标记与钙网织蛋白的标记相似（显示了14-127的结果）。当诺卡唑使内质网从细胞边缘（箭头）收缩时，突变体的标记显示出匹配的重新分布。（e）缺乏中央疏水结构域[β-TM（−）]的Caveolin-2β定位于高尔基体，并被抗-GM130标记。从caveolin-2α中删除相同的结构域得到了相同的结果。

图5
（a）小窝蛋白-2突变体及其在HepG2瞬时表达中的分布图。（b–e）通过抗caveolin-2标记（b、d和e）或EGFP（c）（绿色）观察突变体的分布，并与LD、高尔基体或ER标记（红色）进行比较。箭头标记明显围绕LD的标签。棒材，10μm。（b）单个氨基酸替换物用于检查α和β亚型之间的差异。即使当第二个翻译起始位点蛋氨酸-14被亮氨酸（M14/L）取代，或假定的肉豆蔻酰化位点甘氨酸-2被丙氨酸（G2/a）取代时，其分布与小窝蛋白-2α的分布并无不同。（c） NH公司₂-末端缺失突变体融合到EGFP的COOH末端。多达69个残基的缺失（70-162）不会影响LD的定位，但进一步的截短（71-162）会导致胞浆分布。（d） COOH末端缺失突变体。对于α和β亚型，当序列保持到第150个残基时，其分布没有改变。随着更多氨基酸被删除，LD和高尔基体中的定位变得不那么明显，网络状标记增多。后一种标记与钙网蛋白类似（显示14-127的结果）。当诺卡唑使内质网从细胞边缘（箭头）收缩时，突变体的标记显示出匹配的重新分布。（e）缺乏中央疏水结构域[β-TM（−）]的Caveolin-2β定位于高尔基体，并被抗-GM130标记。从caveolin-2α中删除相同的结构域得到了相同的结果。

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中的注释

Caveolin、胆固醇和脂滴？
范·梅尔（van Meer G.）。范·梅尔（van Meer G.）。细胞生物学杂志。2001年3月5日；152（5）：F29-34。doi:10.1083/jcb.152.5.f29。细胞生物学杂志。2001 PMID：11238468 免费PMC文章。没有可用的摘要。

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参考文献

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[1] Anderson R.G.W.小窝膜系统。每年。生物化学评论。1998;67:199–225.-公共医学

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