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比较研究
.2000年12月5日;278(1):168-82.
doi:10.1006/viro.2000.0618。

从克隆的cDNA中回收新城疫病毒强毒株:外源基因的表达导致生长迟缓和衰减

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从克隆的cDNA中恢复新城疫病毒强毒株:外源基因的表达导致生长迟缓和衰弱

克里希纳穆提等。 病毒学. .
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摘要

重组中基因NDV株Beaudette C和表达额外基因的工程重组NDV完全由克隆的cDNA产生。为此,在T7 RNA聚合酶启动子和肝炎三角洲病毒核酶序列之间的转录质粒中组装病毒基因组的全长cDNA克隆,以八个不同的亚基因组片段表示。通过同时表达来自全长质粒的抗原组感NDV RNA和来自共转染质粒的NDV NP、P和L蛋白,感染性NDV可以在用表达T7 RNA聚合酶的重组痘苗病毒感染的细胞中产生。然后,将转染上清液接种到胚胎特异性无色素卵子的尿囊腔中或在细胞培养中进一步传代后,扩增并回收重组病毒。重组NDV的特征表明其生长和致病性与亲本野生型病毒相似。通过使用该系统,产生了含有编码氯霉素乙酰转移酶(CAT)的外源基因的重组NDV。为此,将含有CAT开放阅读框的CAT转录盒插入全长cDNA的HN和L基因之间的区域,两侧为NDV基因起始和基因结束序列基序。然后将该构建物用于产生表达CAT蛋白的重组NDV。CAT基因保持稳定至少八代,重组体中未发现任何基因丢失。然而,重组病毒的产生与斑块尺寸减小、复制动力学减慢以及产量下降100倍以上有关。此外,该病毒显示蛋的平均死亡时间增加,日龄雏鸡的脑内致病性指数降低,这意味着重组病毒的减弱。因此,将一个额外的基因引入NDV基因组代表了一种实现生长迟缓和衰减的方法。这些结果还表明,NDV可以被工程化以稳定表达外源蛋白,并且可以在未来作为疫苗载体使用。

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