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比较研究
.2000年10月;9(10):2009-17.
doi:10.1110/ps.9.10.2009。

设计大肠杆菌天冬酰胺酶的底物特异性。二、。248位氨基酸替代物选择性降低谷氨酰胺酶活性

附属公司
比较研究

设计大肠杆菌天冬酰胺酶的底物特异性。二、。248位氨基酸替代物选择性降低谷氨酰胺酶活性

C德斯特等。 蛋白质科学. 2000年10月.

摘要

大肠杆菌天冬酰胺酶II作为治疗急性淋巴母细胞白血病的药物,由于该酶具有显著的谷氨酰胺酶副活性,因此使用起来很复杂。为了开发谷氨酰胺酶活性降低的酶形式,构建了许多在底物结合位点附近具有氨基酸替换的变体,并测定了它们的动力学和稳定性。我们发现,替代Asp248对谷氨酰胺周转的影响比天门冬酰胺水解的影响更大。在野生型酶中,N248通过氢键与直接与底物相互作用的侧链来调节底物与相邻亚单位的结合。在变异体N248A中,L-谷氨酰胺因突变而导致的过渡态稳定性损失为15 kJ mol(-1),而L-天冬氨酸β-羟肟酸盐为4 kJ mol/1,L-天冬酰胺为7 kJ mol-1。其他N248变体的差异较小。模拟研究表明,谷氨酰胺酶活性的选择性降低是影响活性位点残基和催化相关水分子的微小构象变化的结果。

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    1. 生物化学。2000年2月15日;39(6):1199-204-公共医学
    1. FEMS微生物快报。1999年9月15日;178(2):327-35-公共医学
    1. 生物化学杂志。1971年1月10日;246(1):88-94-公共医学
    1. 高级酶学相关领域分子生物学。1973;39:185-248-公共医学
    1. FEBS通讯。1974年2月15日;39(2):214-7-公共医学

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