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.2001年2月16日;276(7):5152-65.
doi:10.1074/jbc。M006143200。 Epub 2000年10月19日。

丰富高尔基体膜蛋白的蛋白质组学表征

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丰富高尔基体膜蛋白的蛋白质组学表征

A W钟等。 生物化学杂志. .
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摘要

质谱分析从纯化的肝高尔基体分离到Triton X-114的蛋白质(形态计量学纯度为84%,高尔基标记半乳糖基转移酶在匀浆中的富集倍数为122倍),明确鉴定了81种蛋白质,包括一种新的34 kDa高尔基相关蛋白(GPP34)。膜蛋白补体通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离,并采用延迟提取矩阵辅助激光解吸电离质谱法进行分级方法,通过肽质谱指纹图和串联质谱图进行表征,以生成序列标签,和Edman蛋白质测序。主要膜蛋白对应于已知的高尔基体居民、一种高尔基凝集素、顺行货物和大量贩运蛋白,包括KDEL受体、p24家族成员、SNARE、Rabs、一种ARF-鸟嘌呤核苷酸交换因子和两种SCAMP。使用纯化高尔基体组分中蛋白质的分析分馏和胶体金免疫标记来评估GPP34、两个SNARE、SCAMP和通过蛋白质组学方法鉴定的转运蛋白GBF1、BAP31和α(2)P24以及内质网污染物calnexin的高尔基体内和总细胞分布。虽然GPP34以前从未被确定为蛋白质,但GPP34在高尔基复合体中的定位、GPP34从酵母到人类的保存以及GPP34的细胞内暴露位置预测了一种新的外壳蛋白在高尔基体贩运中的作用。

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