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.2000年8月21日；192(4):565-70.
doi:10.1084/jem.192.4.565。

高迁移率族1蛋白（HMG-1）刺激人单核细胞的促炎细胞因子合成

U安德森 1, H王, K棕榈, A C Aveberger公司, O布鲁姆, H Erlandsson Harris公司, A詹森, R科科拉, M Zhang先生, H杨, K J特蕾西
附属机构

高迁移率族1蛋白（HMG-1）刺激人单核细胞的促炎细胞因子合成

U安德森等。 实验医学杂志. .

摘要

脂多糖（LPS）对动物是致命的，因为它激活细胞因子释放，导致感染性休克和组织损伤。内毒素血症最初几个小时内释放的早期促炎细胞因子（如肿瘤坏死因子[TNF]和白细胞介素[IL]-1）刺激介质级联反应，持续数天，可能导致死亡。高迁移率族1蛋白（HMG-1）是一种普遍存在的DNA结合蛋白，最近被确定为内毒素致死的“晚期”介体。抗-HMG-1抗体可中和血清HMG-1的延迟增加，并防止内毒素致死，即使被动免疫延迟至早期细胞因子反应后。在这里，我们研究了HMG-1是否可以刺激人类外周血单个核细胞培养物中细胞因子的合成。将纯化的重组HMG-1添加到人单核细胞培养物中显著刺激TNF、IL-1α、IL-1β、IL-1RA、IL-6、IL-8、巨噬细胞炎性蛋白-1α和MIP-1β的释放；但不是IL-10或IL-12。激活单核细胞的HMG-1浓度在先前内毒素血症动物和脓毒症患者血清中观察到的病理范围内。HMG-1未能刺激淋巴细胞释放细胞因子，表明细胞刺激具有特异性。与LPS刺激相比，HMG-1刺激后的细胞因子释放延迟且呈双相性。计算机辅助图像分析表明，HMG-1诱导的细胞TNF染色的峰值强度与LPS最大刺激后观察到的峰值强度相当。给Balb/c小鼠服用HMG-1后，体内血清TNF水平显著升高。总之，这些结果表明，与内毒素致死的其他细胞因子介质（如TNF和IL-1）一样，细胞外HMG-1是单核细胞促炎细胞因子合成的调节器。

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数字

图1
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（A） HMG-1刺激培养的人PBMC释放TNF。在多粘菌素B（10μg/ml）存在下，用纯化的rHMG-1（0.001-1μg/ml。数据表示两个单独实验的平均值±SEM（一式三份）。（B） HMG-1诱导人PBMC中TNF mRNA的表达增加。人PBMC在含有rHMG-1（1μg/ml）和多粘菌素B（10μg/ml）的OPTI-MEM I培养基中培养。在指定的时间点采集细胞，并通过RNase Protection（核糖核酸酶保护）分析对照组的TNF mRNA和GAPDH mRNA水平。数据是两个独立实验的代表。（C） HMG-1刺激的产生TNF的PBMC的表型特征。HMG-1刺激8小时后，间接免疫荧光（A，俄勒冈州绿）显示细胞内TNF积聚的典型定位。用罗丹明对同一细胞进行单核细胞标记（B，钙保护素1）染色。（D） HMG-1刺激PBMC后细胞内TNF的表达。在多粘菌素B或脂多糖（100 ng/ml）存在下，单独或与HMG-1（1μg/ml）培养人PBMC。在指定的时间点采集细胞，进行固定，并用间接免疫荧光法对其进行TNF染色。根据形态学和双色染色判断，只有单核细胞有助于TNF的形成。结果表示为单核细胞群中产生TNF的细胞的频率。数据表示三个单独实验的平均值±SEM（一式两份）*P（P）与LPS刺激相比，<0.05。
图1
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（A） HMG-1刺激培养的人PBMC释放TNF。在多粘菌素B（10μg/ml）存在下，用纯化的rHMG-1（0.001-1μg/ml。数据表示两个单独实验的平均值±SEM（一式三份）。（B） HMG-1诱导人PBMC中TNF mRNA的表达增加。人PBMC在含有rHMG-1（1μg/ml）和多粘菌素B（10μg/ml）的OPTI-MEM I培养基中培养。在指定的时间点采集细胞，并通过RNase Protection（核糖核酸酶保护）分析对照组的TNF mRNA和GAPDH mRNA水平。数据是两个独立实验的代表。（C） HMG-1刺激产生TNF的PBMC的表型特征。HMG-1刺激8小时后，间接免疫荧光（A，俄勒冈州绿）显示细胞内TNF积聚的典型定位。用罗丹明对同一细胞进行单核细胞标记（B，钙保护素1）染色。（D） HMG-1刺激PBMC后细胞内TNF的表达。在多粘菌素B或脂多糖（100 ng/ml）存在下，单独或与HMG-1（1μg/ml）培养人PBMC。在指定的时间点采集细胞，进行固定，并用间接免疫荧光法对其进行TNF染色。通过形态学和双色染色判断，只有单核细胞有助于TNF的形成。结果表示为单核细胞群中产生TNF的细胞的频率。数据表示三个单独实验的平均值±SEM（一式两份）*P（P）与LPS刺激相比，<0.05。
图1
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（A） HMG-1刺激培养的人PBMC释放TNF。在多粘菌素B（10μg/ml）存在下，用纯化的rHMG-1（0.001-1μg/ml。数据表示两个单独实验的平均值±SEM（一式三份）。（B） HMG-1诱导人PBMC中TNF mRNA的表达增加。人PBMC在含有rHMG-1（1μg/ml）和多粘菌素B（10μg/ml）的OPTI-MEM I培养基中培养。在指定的时间点采集细胞，并通过RNase Protection（核糖核酸酶保护）分析对照组的TNF mRNA和GAPDH mRNA水平。数据是两个独立实验的代表。（C） HMG-1刺激的产生TNF的PBMC的表型特征。HMG-1刺激8小时后，间接免疫荧光（A，俄勒冈州绿）显示细胞内TNF积聚的典型定位。用罗丹明对同一细胞进行单核细胞标记（B，钙保护素1）染色。（D） HMG-1刺激PBMC后细胞内TNF的表达。在多粘菌素B或脂多糖（100 ng/ml）存在下，单独或与HMG-1（1μg/ml）培养人PBMC。在指定的时间点采集细胞，进行固定，并用间接免疫荧光法对其进行TNF染色。根据形态学和双色染色判断，只有单核细胞有助于TNF的形成。结果表示为单核细胞群中产生TNF的细胞的频率。数据表示三个单独实验的平均值±SEM（一式两份）*P（P）与LPS刺激相比，<0.05。
图1
图1
（A） HMG-1刺激培养的人PBMC释放TNF。在多粘菌素B（10μg/ml）存在下，用纯化的rHMG-1（0.001-1μg/ml。数据表示两个单独实验的平均值±SEM（一式三份）。（B） HMG-1诱导人PBMC中TNF mRNA的表达增加。人PBMC在含有rHMG-1（1μg/ml）和多粘菌素B（10μg/ml）的OPTI-MEM I培养基中培养。在指定的时间点采集细胞，并通过RNase Protection（核糖核酸酶保护）分析对照组的TNF mRNA和GAPDH mRNA水平。数据是两个独立实验的代表。（C） HMG-1刺激产生TNF的PBMC的表型特征。HMG-1刺激8小时后，间接免疫荧光（A，俄勒冈州绿）显示细胞内TNF积聚的典型定位。用罗丹明对同一细胞进行单核细胞标记（B，钙保护素1）染色。（D） HMG-1刺激PBMC后细胞内TNF的表达。在多粘菌素B或脂多糖（100 ng/ml）存在下，单独或与HMG-1（1μg/ml）培养人PBMC。在指定的时间点采集细胞，进行固定，并用间接免疫荧光法对其进行TNF染色。通过形态学和双色染色判断，只有单核细胞有助于TNF的形成。结果表示为单核细胞群中产生TNF的细胞的频率。数据表示三个单独实验的平均值±SEM（一式两份）*P（P）与LPS刺激相比，<0.05。
图2
图2
HMG-1刺激的人PBMC中的TNF表达。人PBMC单独培养或与rHMG-1（1μg/ml）或LPS（100 ng/ml）共同培养（1或8 h），然后染色以检测细胞内TNF。TNF产生的单核细胞有一个胞内圆形褐点，表示TNF在产生细胞的高尔基细胞器中积聚。与HMG-1刺激或非刺激培养物相比，LPS刺激培养物中表达TNF的单核细胞数量在1小时内显著增加。相反，HMG-1刺激在8小时时显著增加TNF表达。未刺激细胞中未检测到TNF。注意培养8小时后单核细胞明显聚集。
图3
图3
体内注射HMG-1刺激小鼠血清TNF增加。Balb/c小鼠按指定剂量腹腔注射rHMG-1；6小时后采集血液，用ELISA法分析血清中的TNF（平均值±SEM，n个= 3).
图4
图4
HMG-1刺激人PBMC中细胞因子和趋化因子的表达。人PBMC用rHMG-1（1μg/ml）加多粘菌素B（10μg/ml）或LPS单独培养（100 ng/ml）。在纵向研究中收集细胞，固定并用间接免疫荧光染色。经双色染色证实，单核细胞是唯一有助于合成所研究介质的细胞*P（P）与LPS相比<0.05。
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