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.2000年8月；68(8):4391-8.
doi:10.1128/IAI.68.8.4391-4398.2000。

白色念珠菌β-1,2-连接的寡甘露聚糖与哺乳动物凝集素-半乳糖凝集素-3同源的32千道尔顿巨噬细胞膜蛋白结合

C弗雷丁 1, D普兰, T Jouault公司
附属公司

白色念珠菌β-1,2-连接的寡甘露聚糖与哺乳动物凝集素-半乳糖凝集素-3同源的32千道尔顿巨噬细胞膜蛋白结合

C弗雷丁等。 感染免疫. 2000年8月.

摘要

白念珠菌细胞壁表面存在β-1,2-键寡甘露聚糖残基，与甘露聚糖和糖脂磷脂磷脂结合。β-1,2-连接的寡甘露糖苷残基作为巨噬细胞的粘附素，刺激这些细胞进行细胞因子的产生。为了表征与识别白色念珠菌β-1,2-寡糖苷相关的巨噬细胞受体，我们使用了J774小鼠细胞系，该细胞系缺乏α-甘露糖残基特异性受体。一系列基于与白色念珠菌酵母细胞或β-1,2-寡核苷酸结合的牛血清白蛋白（BSA）的亲和力结合的实验以及随后与生物素化结合的BSA的公开反复导致了32-kDa巨噬细胞蛋白的检测。针对该32-kDa蛋白的抗血清抑制了白色念珠菌与巨噬细胞的结合，并用于免疫沉淀该分子。来自32-kDa胰蛋白酶消化物的两个高压液相色谱纯化的肽与半乳糖凝集素-3（以前称为Mac-2抗原）完全同源，半乳糖凝素-3是一种具有多效性功能的内源性凝集素，在白念珠菌作为腐生细胞或寄生虫与之相互作用的多种细胞类型中表达。

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数字

图1
图1
J774表面膜蛋白与酵母细胞的结合分析。使用Triton X-100对J774细胞的质膜蛋白进行生物素化并提取。可溶性提取物与酿酒酵母（车道2）或白色念珠菌（3巷）芽生孢子。清洗样品后，洗脱结合蛋白，用SDS-PAGE进行拆分，并用碱性磷酸酶偶联链霉亲和素进行印迹。1号巷含有生物素化细胞的总提取物。箭头表示两种酵母相关蛋白之间的主要差异。分子量（单位：千）如右图所示。
图2
图2
β-1,2-Man–BSA识别的32-kDa巨噬细胞蛋白的鉴定和定位。泳道1显示MAb AF1与解偶联BSA的反应性。（B）J774细胞与biot BSA（a）或biot-β-1,2-Man–BSA（B）孵育。荧光素结合链霉亲和素显示结合蛋白。（C） 将J774细胞的提取物用biot-BSA（第1道）、biot-α-人-牛血清白蛋白（第2道）或biot-β-1,2-Man-牛血清抗原（第3道）进行印迹，并用过氧化物酶结合链霉亲和素显示。箭头指示32-kDa蛋白质的位置。这些实验进行了三到五次，结果相同。面板A和C右侧给出了分子量（单位：千）。
图3
图3
β-1,2-Man–BSA和白色念珠菌芽生孢子。J774提取物与白色念珠菌酵母细胞（A）或与β-1,2-Man–BSA（B）偶联的Sepharose珠。结合材料洗脱、电泳，并用biot-BSA（车道1）或biot-β-1,2-Man–BSA（车道2）进行印迹。箭头指示32-kDa蛋白质的位置。实验重复至少五次，结果相同。面板右侧给出了分子量（单位：千）。
图4
图4
抗32-kDa多克隆抗体的特异性白色念珠菌与J774细胞结合。（A） J774蛋白质洗脱自白色念珠菌用biot-β-1,2-Man–BSA（第1道）或用鼠抗32-kDa蛋白的多克隆抗体（第2道）检测到芽生孢子。（B） J774电池（105每孔细胞数）在37°C下在八个实验室-泰克组织培养室中培养，并加入1:100稀释的免疫前或免疫性抗32kDa多克隆抗体。白色念珠菌然后以50:1的酵母细胞比添加酵母细胞。对载玻片进行清洗、固定和安装，以进行显微镜检查。数据表示为J774细胞数量与细胞摄入酵母数量的关系。实验重复至少五次，结果相似。分子量（以千计）在面板A的右侧给出。
图5
图5
32-kDa蛋白和MMR抗原性的比较。用抗32-kDa（A）或抗MMR（B）多克隆抗体对小鼠腹腔巨噬细胞（MA）或J774细胞（J774）的提取物进行印迹，并显示与过氧化物酶结合的特异性抗血清。实验重复至少三次，结果相同。
图6
图6
32-kDa蛋白和半乳糖凝集素-3的两个肽之间的序列同源性。用抗32-kDa抗血清免疫沉淀J774细胞32-kDa蛋白，用SDS-PAGE进行分离，并按照材料和方法中的描述进行胰蛋白酶消化。肽通过HPLC分离。两种肽（pept17和pept19）与已知蛋白质的同源性通过Swiss-Prot数据库进行了检查。
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